Superstart qPCR Premix plus-UNG

Cat No: HCB5071E

Paquet: 100RXN/1000RXN/10000RXN

Liofilitzable

Modificació d'anticossos, 95 ℃, inici en calent d'1 a 5 minuts

Alta sensibilitat i especificitat

Detecció estable a baixa concentració, alt valor de fluorescència

Envieu la consulta

Descripció del producte

Detall del producte

Cat No: HCB5071E

Superstart qPCR Premix plus-UNG és un reactiu especialitzat dissenyat per a reaccions qualitatives i quantitatives de PCR en temps real mitjançant detecció basada en sondes, desenvolupat específicament per a processos de liofilització.Conté un nou enzim d'arrencada en calent Hotstart Taq plus (DG), que té la seva activitat enzimàtica Taq segellada a temperatura ambient, inhibint eficaçment l'amplificació inespecífica causada pel recuit inespecífic de l'imprimació o la formació de dímers d'imprimació en condicions de baixa temperatura, millorant així. l'especificitat de la reacció d'amplificació.Aquest reactiu utilitza un tampó específic de qPCR optimitzat i un sistema anticontaminació UNG/dUTP per aconseguir un ràpid arrencada en calent, millorant considerablement l'eficiència i la sensibilitat de les reaccions qPCR.Pot obtenir bones corbes estàndard en una àmplia gamma d'àrees de quantificació i realitzar la quantificació amb precisió, evitant eficaçment l'amplificació falsa positiva causada per productes de PCR residuals o contaminació d'aerosols.Aquest reactiu és compatible amb la majoria d'instruments de PCR quantitatius fluorescents de fabricants com Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad i Roche, etc., i presenta una bona estabilitat en forma liofilitzada.

Anterior: BsaI HCP1014A

Pròxim: Proteinasa K (líquid) HC4502A

Composició del reactiu

1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg²⁺gratuït) (DG)

2. 250 mM de MgCl₂

3. 4 × lioprotector (opcional)

Condicions d'emmagatzematge

Emmagatzematge a llarg termini a -20 ℃;es pot emmagatzemar a 4 ℃ fins a 3 mesos.Barrejar bé abans d'utilitzar ievitar les congelacions i descongelacions repetides.

Protocol de ciclisme

Procediment	Temp.	Temps	Cicle
Digestió	50℃	2 min	1
Activació de la polimerasa	95℃	1 ~ 5 min	1
Desnaturalitzar	95℃	10~20 s	40-50
Recuit i Extensió	56 ~ 64 ℃	20~60 s	40-50

qPCR Liquid Reaction SyPreparació de la tija

Composició	Volum de 25 µl	50 µl de volum	Concentració final
5×HotstartPremix plus-UNG(Mg²⁺gratuït) (DG)	5 µl	10 µl	1×
250 mM de MgCl₂	0,45 µl	0,9 µl	4,5 mM
4 × lioprotector¹	6,25 µl	12,5 µl	1×
25 × mescla imprimació-sonda²	1 µl	2 µl	1×
Plantilla d'ADN³	——	——	——
ddH₂O	Fins a 25 µl	Fins a 50 µl	——

1. Una concentració final de 0,2μM per a imprimadors sol donar bons resultats;quan el rendiment de la reacció sigui deficient, ajusteu la concentració d'imprimació dins del rang de 0,2-1 μM segons sigui necessari.La concentració de la sonda normalment s'optimitza dins del rang de 0,1-0,3μM mitjançant experiments de gradient per trobar combinacions òptimes.

2. El nombre de còpies de gens diana continguts en diferents tipus de plantilles varia;si cal, es pot realitzar una dilució en gradient per determinar la quantitat d'addició de plantilla òptima.

3. Aquest sistema es pot liofilitzar;Quan els clients utilitzen aquest sistema sense requisits de liofilització, es poden afegir 4 × lioprotectors selectivament; si es requereixen productes liofilitzats, durant la validació del rendiment del producte en fase de reactius líquids, cal afegir 4 × lioprotectors per garantir la coherència amb els components del sistema liofilitzat. i efectes.

Quan s'utilitza el sistemad per a la liofilització, preparar el sistema as següent:

Composició	25µL Sistema de reacció
5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg²⁺gratuït) (DG)	5 µl
250 mM de MgCl₂	0,45 µl
4 × lioprotector	6,25 µl
25 × mescla imprimació-sonda	1 µl
ddH₂O	Fins a 18 ~ 20 µL

* Si es necessiten altres sistemes per a la liofilització, consultar per separat.

Procediment de liofilitzacióss

Procediment	Temp.	Temps	Condició	Pressió
Precongelació	4℃	30 min	Aguanta	1 atm
	-50℃	60 min	Refrigeració
	-50℃	180 min	Aguanta
Assecat primari	-30℃	60 min	Calefacció	El buit definitiu
Assecat primari	-30℃	70 min	Aguanta	El buit definitiu
Assecat secundari	25℃	60 min	Calefacció	El buit definitiu
Assecat secundari	25℃	300 min	Aguanta	El buit definitiu

1. Aquest procés de liofilització és un procés de liofilització in situ per a un sistema de reacció de 25µL;siEs requereixen perles de liofilització o altres processos de liofilització in situ, si us plau, consulteu per separat.

2. El procés de liofilització anterior només té caràcter de referència.Els diferents tipus de productes i els diferents assecadors de congelació tenen diferents paràmetres, de manera que es poden fer ajustos segons la realitat.condicions durant l'ús.

3. Diferents processos de liofilització poden ser adequats per a diferents mides de lots de liofilitzatsproductes, de manera que s'ha de realitzar una validació de proves suficient quan s'utilitzen per a la producció a gran escala.

Instruccions per a l'ús del liofilitzatd en pols

1. Centrifuga breument la pols liofilitzada;

2. Afegiu la plantilla d'àcid nucleic a la pols liofilitzada i afegiu aigua fins a 25 µL;

3. Barrejar bé per centrifugació i executar a màquina.

Control de qualitat:

1. Proves funcionals: sensibilitat, especificitat, reproductibilitat de qPCR.

2. Sense activitat nucleasa exògena, ni contaminació exògena d'endo/exonucleasa.

Informació tècnica:

1. Superstart qPCR Premix plus-UNG utilitza un nou enzim d'arrencada en calent que permet un engegada ràpid en calent en 1 ~ 5 minuts;mitjançant una formulació tampó especial és adequat per a reaccions de PCR quantitatives fluorescents multiplex.

2. Té una especificitat més alta que millora significativament la sensibilitat de la detecció de límits PCR quantitativa de fluorescència, fent que les corbes d'amplificació normalitzin, el valor de fluorescència obtingui una millora òbvia en plantilles de concentració baixa, adequats com a reactius de detecció quantitativa de PCR de fluorescència d'alta sensibilitat.

3. Per a imprimadors amb una temperatura de recuit més baixa o fragments de més de 200 pb, es recomana el mètode de 3 passos.

4. L'eficiència d'utilització de dUTP i la sensibilitat a l'enzim UNG difereixen per a diferents gens diana, per tant, si l'ús del sistema UNG condueix a una disminució de la sensibilitat de detecció, el sistema de reacció s'hauria d'ajustar i optimitzar.Si necessiteu suport tècnic, poseu-vos en contacte amb la nostra empresa.

5. Utilitzeu àrees i pipetes dedicades abans i després de l'amplificació, utilitzeu guants durant el funcionament i substituïu-los amb freqüència;No obriu el tub de reacció després de la finalització de la PCR per minimitzar la contaminació de les mostres per productes de PCR.