2 × HiF Taq més Master Mix
Cat No: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (amb colorant) és una solució preparada per utilitzar 2 × que conté DNA polimerasa Plus HIF, dNTPs i tampó optimitzat.S'afegeixen a la mescla mestra dos anticossos monoclonals a temperatura ambient que inhibeixen l'activitat de la polimerasa i l'activitat de l'exonucleasa 3'→5' per a una PCR Hot Start fàcil i altament específica.El factor d'extensió s'afegeix a la mescla mestra per donar a l'enzim una capacitat d'amplificació de fragments llargs, la longitud de l'amplificació pot ser de fins a 13 kb, l'enzim té una activitat d'ADN polimerasa de 5'→3' i una 3'→5'. Activitat exonucleasa, la seva fidelitat és 83 vegades la de l'ADN polimerasa Taq, que és 9 vegades la de l'ADN polimerasa ordinària.És adequat per a l'amplificació de plantilles complexes, el producte d'amplificació és un extrem rom.
2 × HIF Taq plus Master Mix (amb colorant) té els avantatges de ser ràpid i fàcil, alta sensibilitat, forta especificitat, bona estabilitat, etc., el sistema de reacció només necessita afegir primers i plantilles i es pot amplificar amb dos protocol de passos, simplificant els passos experimentals i estalviant temps.Aquest producte conté colorants indicadors d'electroforesi i els productes de PCR es poden utilitzar directament per a l'electroforesi.A més, el producte també conté un agent protector específic, de manera que la mescla mestra pot mantenir una activitat estable després de la congelació-descongelació repetida.
Condicions d'emmagatzematge
Els productes s'han d'emmagatzemar a -25 ~ -15 ℃ durant 1 any.
Especificacions
| Especificació del producte | Master Mix |
| Concentració | 2× |
| Inici en calent | Inici en calent integrat |
| voladís | Despuntar |
| Velocitat de reacció | Ràpid |
| Mida (producte final) | Fins a 13 kb |
| Condicions per al transport | Gel sec |
| Tipus de Producte | Premescles de PCR d'alta fidelitat |
Instruccions
1.Sistema de reacció PCR
| Components | Volum (μl) |
| Plantilla d'ADN | Adequat |
| Cebador directe (10 μmol/L) | 2.5 |
| Cebador invers (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq més Master Mix | 25 |
| ddH2O | a 50 |
2.Ús recomanat de diferents plantilles
| Tipus de plantilla | Amplificar fragments d'1 kb a 10 kb |
| ADN genòmic | 50 ng-200 ng |
| ADN plasmidi o viral | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (no supereu el 10% del volum final de reacció de PCR) |
3.Protocol d'amplificació
1) Protocol en dos passos (plantilla de complexitat)
| Pas de cicle | Temp. | Temps | Cicles |
| Desnaturalització inicial | 98℃ | 3 min | 1 |
| Desnaturalització | 98℃ | 10 segons | 30-35 |
| Extensió | 68℃ | 30 segons/kb | |
| Pròrroga final | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Protocol de tres passos (protocol normal)
| Pas de cicle | Temp. | Temps | Cicles |
| Desnaturalització inicial | 98℃ | 3 min | 1 |
| Desnaturalització | 98℃ | 10 segons | 30-35 |
| Recuit | 60℃ | 20 segons | |
| Extensió | 72℃ | 30 segons/kb | |
| Pròrroga final | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Protocol de gradient de recuit (plantilla de complexitat)
| Pas de cicle | Temperatura | Temps | Cicles |
| Desnaturalització inicial | 98℃ | 3 min | 1 |
| Desnaturalització | 98℃ | 10 segons | 15 (1℃ de reducció per cicle) |
| Recuit gradient | 70-55 ℃ | 20 segons | |
| Extensió | 72℃ | 30 segons/kb | |
| Desnaturalització | 98℃ | 10 segons |
20 |
| Recuit | 55℃ | 20 segons | |
| Extensió | 72℃ | 30 segons/kb | |
| Pròrroga final | 72℃ | 5 min | 1 |
Funcions sota diferents protocols d'amplificació
| Protocol | Dos passos | Tres passos | Recuit gradient |
| Especificació. | ràpid | mitjà | lent |
| Especificitat | alt | mitjà | alt |
| Rendiment de la PCR | mitjà | alt | mitjà |
| Taxa de detecció | alt | mitjà | alt |
Notes
Si us plau, feu servir l'EPI necessari, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat!
