Rnasa A
La ribonucleasa A (RNasaA) és un polipèptid monocatenari que conté 4 enllaços disulfur amb un pes molecular d'uns 13,7 kDa.La RNasa A és una endoribonucleasa que degrada específicament l'ARN monocatenari als residus C i U.Concretament, l'escissió reconeix l'enllaç fosfodièster format per la 5'-ribosa d'un nucleòtid i el grup fosfat de la 3'-ribosa del nucleòtid de pirimidina adjacent, de manera que els 2,3'-fosfats cíclics s'hidrolitzen als 3 corresponents. 'nucleòsids fosfats (per exemple, pG-pG-pC-pA-pG és escindit per la RNasa A per generar pG-pG-pCp i A-PG).La RNasa A és la més activa en l'escissió de l'ARN monocatenari.La concentració de treball recomanada és d'1-100 μ G/mL, compatible amb diversos sistemes de reacció.Es pot utilitzar una concentració baixa de sal (0-100 mM NaCl) per tallar ARN monocatenari, ARN doble cadena i cadenes d'ARN formades per hibridació ARN-ADN.
Tanmateix, a una concentració de sal elevada (≥0, 3 M), la RNasa A només escinda específicament l'ARN monocatenari.
La RNasa A s'utilitza més habitualment per eliminar l'ARN durant la preparació d'ADN plasmidi o ADN genòmic.Que la DNasa estigui activa o no durant el procés de preparació pot afectar fàcilment la reacció.El mètode tradicional d'ebullició en un bany maria es pot utilitzar per inactivar l'activitat de la DNasa.Aquest producte no conté DNasa ni proteasa, i no requereix tractament tèrmic abans de l'ús.A més, aquest producte també es pot utilitzar en experiments de biologia molecular com ara l'anàlisi de protecció de la RNasa i l'anàlisi de la seqüència d'ARN.
Condicions d'emmagatzematge
El producte s'ha d'emmagatzemar a -25 ℃ ~ - 15 ℃ durant 2 anys.
Especificacions
| Aparença | Pols |
| Quantitat | 100 mg / 1 g |
| Tipus de Producte | RNasa A |
Instruccions
Aquest és un dels mètodes habituals per preparar la solució d'emmagatzematge de la RNasa A.També es pot prepararper altres mètodes segons els mètodes tradicionals del laboratori o de la literatura de referència (com aradissolt directament en Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 o solució de Tris-NaCl)
1. Utilitzeu acetat de sodi 10 mM (pH 5,2) per preparar 10 mg/mL de solució d'emmagatzematge de RNasa A.
2. Escalfament a 100 ℃ durant 15 min.
3. Refredar a temperatura ambient, afegir 1/10 de volum de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), ajustar el seu pH a 7,4 (per aper exemple, afegiu 500 ml de solució d'emmagatzematge de RNasa 10 mg/ml Tris-HCl 1 M, pH 7,4).
4. Sub-envasat a -20 ℃ per a l'emmagatzematge congelat, que pot ser estable fins a 2 anys.
[Notes]:
Quan es bull la solució de RNasa A en condicions neutres, es formarà precipitació de RNasa;Bulliu-lo a un pH més baix, i si hi ha precipitació es pot observar, que pot ser provocat per la presència d'impureses proteiques.Si es troben sediments després de l'ebullició, les impureses es poden eliminar mitjançant una centrifugació d'alta velocitat (13000 rpm) i després subenvasar-les per congelar-les.
Notes
Si us plau, utilitzeu els EPI necessaris, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat.
