Reactiu d'alliberament de mostra
El reactiu d'alliberament de mostra és per a escenaris de diagnòstic POCT molecular.Per als dos sistemes d'amplificació directa LAMP i PCR d'amplificació directa, no hi ha necessitat d'extracció d'àcids nucleics.El lisat brut de la mostra es pot amplificar directament, el gen objectiu es pot detectar amb precisió, el temps de detecció de la mostra es pot escurçar encara més, cosa que s'adapta perfectament als requisits d'aplicació del POCT molecular.És adequat per a hisops nasals, hisops de gola i altres tipus de mostres.Les mostres processades es poden utilitzar directament per a la detecció quantitativa de PCR o LAMP de fluorescència en temps real, i es poden aconseguir els mateixos resultats que els mètodes d'extracció convencionals sense operacions complicades d'extracció d'àcids nucleics.
Condicions d'emmagatzematge
Transportar i emmagatzemar a temperatura ambient.
Control de qualitat
Detecció funcional: qPCR quantitativa: el sistema de reactiu d'alliberament de mostres de 800 μl es va amplificar
amb 1.000 còpies Novel Pseudovirus, una mostra d'hisop nasal, amb corbes d'amplificació similars iValors de ΔCt dins de ± 0,5 Ct.
Procediment experimentalres
1. Agafeu 800 μl de reactiu d'alliberament de mostra i esteneu la solució de lisi en un tub de mostreig d'1,5 ml.
2. Agafeu el hisop nasal o el hisop de gola amb el hisop; Procediment de mostreig del bastoncill nasal: agafeu el hisop estèril i poseu-lo a les fosses nasals, avança lentament fins a uns 1,5 cm de profunditat, gira suaument 4 vegades contra la mucosa nasal durant més de 15 segons. , a continuació, repetiu la mateixa operació a l'altra cavitat nasal amb el mateix hisop. Procediment de mostreig d'un hisop de gola: agafeu el hisop estèril i, suaument, netegeu ràpidament les amígdales faríngies i la paret faríngia posterior 3 vegades.
3.Col·loqueu el hisop immediatament al tub de mostreig.S'ha de girar el capçal del hisop i barrejar-lo a la solució d'emmagatzematge durant almenys 30 segons per assegurar-se que la mostra s'elueix completament al tub de mostreig.
4. Incubació a temperatura ambient (20 ~ 25 ℃) durant 1 min, s'ha completat la preparació del tampó de lisi.
5. Tant el sistema RT-PCR com el RT-LAMP de 25 μl eren compatibles amb una quantitat de 10 μl d'addició de plantilla per a experiments de detecció.
Notes
1. La quantitat mínima de lisat directe de mostra corresponent a un únic hisop es pot ajustar a 400μl, que es pot ajustar segons les necessitats de la prova.
2. Un cop processada la mostra pel reactiu d'alliberament de la mostra, es recomana dur a terme la següent fase de prova tan aviat com sigui possible, l'interval de temps d'espera és preferiblement inferior a 1 hora.
3. El pH del lisat de mostra és àcid, i el sistema de detecció ha de tenir un determinat tampó.És adequat per a la majoria de deteccions de fluorescència PCR, RT-PCR i LAMP amb tampó de pH, però no és adequat per a la detecció colorimètrica de LAMP sense tampó.
