One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Cat No: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix és per a la quantificació de fluorescència basada en el colorant SYBR Green I.Utilitzant cebadors específics de gens, les reaccions de transcripció inversa i qPCR es completen en un tub, eliminant la necessitat d'operacions repetides d'obertura de tapes i pipetes, millorant considerablement l'eficiència de l'assaig i reduint el risc de contaminació.Per a mostres d'ARN, el kit utilitza transcriptasa inversa resistent a la calor per a una síntesi eficient d'ADNc i HotStart Taq DNA polimerasa per a l'amplificació quantitativa.Sota el sistema de tampó optimitzat, la sensibilitat del kit pot arribar a ser de 0,1 pg per a objectius altament expressats i fins a 1 pg per a objectius moderadament expressats.El kit és adequat per a l'amplificació i quantificació de mostres d'ADN.Permet la detecció i quantificació sensible d'àcids nucleics de diferents mostres vegetals i animals, cèl·lules i microorganismes.
Components
| No | Nom | Volum | Volum |
| 1 | Buffer avançat | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Barreja d'enzims avançats | 20 μl | 200 μl |
| 3 | H lliure de RNasa2O | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
Condicions d'emmagatzematge
Aquest producte s'ha d'emmagatzemar a -25 ~ -15 ℃ lluny de la llum durant 1 any.
Instruccions
1.Configuració del sistema de reacciód
| Components | Volum (μl) | Volum (μl) | Concentració final |
| Buffer avançat | 12.5 | 25 | 1× |
| Barreja d'enzims avançats | 1 | 2 | - |
| Primer primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Cebador invers (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Plantilla d'ARNb | X | X | - |
| H lliure de RNasa2Oc | a 25 | a 50 | - |
Notes:
1) a.TLa concentració final d'imprimació va ser de 0,2 μmol/L, que també es podia ajustar entre 0,1 i 1 μmol/L segons correspongués.
2) b.El reactiu és extremadament sensible, amb l'ARN total en el rang d'1pg-1μg, i les proves de mostres humanes van mostrar una entrada òptima d'1 pg-100 ng, controlant un valor Ct global en el rang de 15-30 segons correspongui.
3) c.Es recomana utilitzar 20 μL o 50 μL per garantir la validesa i la reproductibilitat de l'amplificació del gen objectiu.
4) d.Si us plau, prepareu-vos al banc ultra net i utilitzeu puntes i tubs de reacció sense residus de nucleases;Es recomanen puntes amb cartutxos de filtre.Eviteu la contaminació creuada i la contaminació per aerosols.
2.Programa de reacció
| Pas de cicle | Temp. | Temps | Cicles |
| Transcripció inversa | 50℃a | 6 minuts | 1 |
| Desnaturalització inicial | 95℃ | 5 minuts | 1 |
| Reacció d'amplificació | 95℃ | 15 segons | 40 |
| 60℃b | 30 segons | ||
| Etapa de la corba de fusió | Valors per defecte de l'instrument | 1 | |
Notes:
1) a.La temperatura de transcripció inversa es pot seleccionar entre 50-55 °C segons les necessitats experimentals.Per a mostres d'ADN, es pot ometre el procés de transcripció inversa.
2) b.En casos especials, la temperatura de recuit/extensió es pot ajustar segons el valor Tm d'imprimació, es recomana 60 °C.
Notes
1. Aquest producte només és per a ús d'investigació.
2. Si us plau, opereu amb bates de laboratori i guants d'un sol ús, per la vostra seguretat.
