Inhibidor de rnasa (sense glicerol)
L'inhibidor de la RNasa murina és un inhibidor de la RNasa murina recombinant expressat i purificat a partir d'E.coli.S'uneix a la RNasa A, B o C en una proporció 1:1 mitjançant enllaços no covalents, inhibint així l'activitat dels tres enzims i protegint l'ARN de la degradació.Tanmateix, no és efectiu contra la RNasa 1, la RNasa T1, la nucleasa S1, la RNasa H o la RNasa d'Aspergillus.L'inhibidor de la RNasa murina es va provar mitjançant RT-PCR, RT-qPCR i ARNm IVT i era compatible amb diverses transcriptases inverses, ADN polimerases i ARN polimerases comercials.
En comparació amb els inhibidors de la RNasa humana, l'inhibidor de la RNasa murina no conté dues cisteïnes altament sensibles a l'oxidació que provoca la inactivació de l'inhibidor.Això fa que sigui estable a baixes concentracions de TDT (menys d'1 mM).Aquesta característica el fa adequat per utilitzar-lo en reaccions on altes concentracions de DTT són adverses per a la reacció (p. ex. RT-PCR en temps real).
Aaplicació
Aquest producte es pot utilitzar àmpliament en qualsevol experiment on la interferència de la RNasa sigui possible per evitar la degradació de l'ARN, com ara:
1.Síntesi d'ADNc de la primera cadena, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2.Protegir l'ARN de la degradació en transcripció/traducció in vitro (per exemple, replicació viral in vitro);
3.Inhibició de l'activitat de la RNasa durant l'aïllament i la purificació de l'ARN.
Condicions d'emmagatzematge
Emmagatzemar a -25 ~ -15 ℃;
cicles de congelació-descongelació ≤ 5 vegades;
Vàlid durant 1 any.
Definició de la unitat
Una unitat es defineix com la quantitat d'inhibidor de RNasa necessària per inhibir l'activitat de 5 ng d'RNasa A en un 50%.
Pes molecular
L'inhibidor de la RNasa (sense glicerol) és una proteïna de 50 kDa.
Control de qualitat
Exonucleasa Activitat:
La incubació de 40 U d'enzim amb 1 μg d'ADN de digestió λ-Hind III durant 16 hores a 37 ° C no va donar lloc a una degradació detectable de l'ADN tal com es va determinar per electroforesi en gel.
Activitat de l'endonucleasa:
La incubació de 40 U d'enzim amb 1 μg λ d'ADN durant 16 hores a 37 ° C no va donar lloc a una degradació detectable de l'ADN tal com es va determinar per electroforesi en gel.
Nicking Activitat:
La incubació de 40 U d'enzim amb 1 μg de pBR322 durant 16 hores a 37 ℃ no va donar lloc a una degradació detectable de l'ADN tal com es determina per electroforesi en gel.
RNasa Activitat:
La incubació de 40 U d'enzim amb 1, 6 μg d'ARN MS2 durant 4 hores a 37 ℃ no va donar lloc a una degradació detectable de l'ARN tal com es determina mitjançant l'electroforesi en gel.
E.ADN coli:
TaqMan qPCR detecta 40 U d'enzim.L'ADN d'E.coli és ≤ 0, 1pg/40U.
Notes
1. No agiteu ni remeneu violentament per evitar la inactivació de l'enzim.
L'inhibidor 2.RNasa està actiu a temperatures que oscil·len entre 25 ℃ i 55 ℃ i s'inactiva a ≥65 ℃.
3. L'activitat de la RNasa H, la RNasa 1 i la RNasa T1 no s'inhibeix.
4. El rang de pH per inhibir l'activitat de la RNasa és ampli (actiu a pH 5-9), mostrant la màxima activitat a pH 7-8.
