Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat No: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) és un kit de PCR quantitativa multiplex basat en ARN com a plantilla.En el procés de l'experiment, es va dur a terme la transcripció inversa i la PCR quantitativa en el mateix tub, la qual cosa va simplificar l'operació experimental i va reduir el risc de contaminació.En aquest kit, la primera cadena d'ADNc es va sintetitzar de manera eficient mitjançant la transcriptasa inversa resistent a la calor i es va amplificar quantitativament per l'ADN polimerasa HotStart Tag.El kit conté principalment tampó MP optimitzat, barreja d'enzims, etc. La solució tampó ja conté Mg2+i dNTP.A més, s'afegeixen els factors que poden inhibir eficaçment l'amplificació de PCR inespecífica i millorar l'eficiència d'amplificació de múltiples reaccions qPCR, cosa que pot garantir l'eficiència de l'amplificació i dur a terme una reacció d'amplificació múltiple.Es va afegir el sistema dUTP/UDG per prevenir eficaçment el risc de contaminació per aerosol.
Components
1. Tampó
2. Barreja d'enzims
Especificació
| Inici en calent | Arrencada en calent integrat |
| Mètode de detecció | Detecció d'encebador-sonda |
| Mètode PCR | RT-qPCR d'un pas |
| Polimerasa | Taq DNA polimerasa |
| Tipus de mostra | ADN |
Condicions d'emmagatzematge
El producte s'envia amb gel sec i es pot emmagatzemar a -25 ~ -15 ℃ durant 1 any.S'ha d'evitar freqüentscongelació-descongelació.Es recomana desar per separat.
Instruccions
1.Reacció Sistema
| Components | Volum (μl) | Concentració final |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Barreja d'enzims | 1 | - |
| Barreja imprimació/sonda (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Plantilla RNA | 1-10 | - |
| H2O lliure de RNasa | a 25 | - |
Notes:
Assegureu-vos de barrejar bé abans d'utilitzar, eviteu bombolles excessives causades per vibracions violentes.
a.Concentració d'imprimació: barreja d'imprimació que inclou imprimació múltiple, depenent de la situació la concentració òptima d'imprimació potser entre 0.l i 1.0μM.
b.Concentració de la sonda: barreja de sondes que inclou el grup fluorescent de diferència d'etiquetatge de la sonda múltiple, depenent de la situació, la concentració òptima de la sonda potser entre 0,05 i 0,5 μM.
c.Dilució de la plantilla: la qPCR és altament sensible i es recomana diluir la plantilla.El valor Ct de control és adequat entre 20 i 35.
d.Preparació del sistema: si us plau, prepareu-vos a la taula de treball ultra neta i al pipeta i al tub de reacció sense residus de nucleases;es recomana utilitzar el capçal de la pistola amb element de filtre.Eviteu la contaminació creuada i la contaminació per aerosols.
2. Ciclisme optimitzatProtocol
| Cicle pas | Temp. | Temps | Cicles |
| Transcripció inversa | 50℃a | 20 minuts | 1 |
| Inicial-desnaturalització | 95℃ | 5 minuts | 1 |
| Reacció d'amplificació | 95℃ | 15 segons |
40-45 |
| 60℃ b | 30 segons c |
Notes:
a.Transcripció inversa: la temperatura pot seleccionar 42 °C o 50 °C.
b.Reacció d'amplificació: La temperatura s'ajusta segons el valor de Tm dels primers dissenyats.
c.Adquisició del senyal de fluorescència: configureu el procediment experimental segons els requisits del manual de l'instrument.
Notes
Si us plau, utilitzeu els EPI necessaris, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat.
