Kit de genotipat del ratolí

Cat No: HCR2021A

Aquest producte és un kit dissenyat per a la identificació ràpida de genotips de ratolí, inclosa l'extracció d'ADN brut i el sistema d'amplificació per PCR.El producte es pot utilitzar per a l'amplificació de PCR directament des de la cua del ratolí, l'orella, el dit del peu i altres teixits després d'una simple divisió per Lysis Buffer i Proteinase k.Sense digestió durant la nit, extracció de fenol-cloroform o purificació de columna, que és senzill i redueix el temps dels experiments.El producte és adequat per a l'amplificació de fragments diana de fins a 2 kb i reaccions de PCR multiplex amb fins a 3 parells d'encebadors.El 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix conté DNA polimerasa modificada genèticament, Mg²⁺, dNTPs i un sistema tampó optimitzat per proporcionar una alta eficiència d'amplificació i tolerància als inhibidors, de manera que les reaccions de PCR es poden dur a terme afegint plantilla i cebadors i rehidratant el producte a 1 ×.El producte de PCR amplificat amb aquest producte té una base "A" prominent a l'extrem 3' i es pot utilitzar directament per a la clonació de TA després de la purificació.

Components

Condicions d'emmagatzematge

Els productes s'han d'emmagatzemar a -25 ~ -15 ℃ durant 2 anys.Després de descongelar, el tampó de lisi es pot emmagatzemar a 2 ~ 8 ℃ per a un ús múltiple a curt termini i barrejar bé quan s'utilitza.

Aplicació

Aquest producte és adequat per a l'anàlisi d'eliminació de ratolí, detecció de transgènics, genotipat, etc.

Característiques

1.Funcionament senzill: no cal extreure ADN genòmic;

2.Àmplia aplicació: adequat per a l'amplificació directa de diversos teixits de ratolí.

Instruccions

1.Alliberament d'ADN genòmic

1) Preparació del lisat

El lisat de teixits es prepara segons el nombre de mostres de ratolí que s'han de lisar (el lisat de teixits s'ha de preparar in situ segons la dosi i barrejar-lo bé per utilitzar-lo) i la proporció de reactius requerits per a una sola mostra és la següent:

2) Preparació de la mostra i lisi

Ús de teixit recomanat

Agafeu una quantitat adequada de mostres de teixit de ratolí en tubs de centrífuga nets, afegiu 200 μL de lisat de teixit fresc a cada tub de centrífuga, agiteu-ho amb vòrtex i agiteu-lo, incubeu-lo a 55 ℃ durant 30 minuts i, a continuació, escalfeu-lo a 98 ℃ durant 3 minuts.

3) Centrifugació

Agiteu bé el lisat i centrifugueu a 12.000 rpm durant 5 minuts.El sobrenedant es pot utilitzar com a plantilla per a l'amplificació per PCR.Si la plantilla és necessària per a l'emmagatzematge, transferiu el sobrenedant a un altre tub de centrífuga estèril i emmagatzemeu-lo a -20 ℃ durant 2 setmanes.

2.Amplificació per PCR

Traieu la barreja de PCR directa de teixit de ratolí 2 × de -20 ℃ i descongeleu-la sobre gel, barregeu-la cap per avall i prepareu el sistema de reacció de PCR segons la taula següent (funcioneu amb gel):

Nota:

a) La quantitat afegida no ha de superar 1/10 del sistema, i si s'afegeix massa, es pot inhibir l'amplificació per PCR.

Condicions de PCR recomanades

Nota:

a) Temperatura de recuit: en referència al valor Tm de l'imprimació, es recomana establir la temperatura de recuit al valor Tm més petit de l'imprimació +3 ~ 5 ℃.

Problemes comuns i solucions

1.Sense tires dirigides

1) Producte de lisi excessiu.Trieu la quantitat més adequada de plantilla, normalment no més d'1/10 del sistema;

2) Mida de mostra massa gran.Dilueix el lisat 10 vegades i després amplifica, o redueix la mida de la mostra i torna a lisis;

3) Les mostres de teixit no són fresques.Es recomana utilitzar mostres de teixit fresques;

4) Mala qualitat de la imprimació.Utilitzeu l'ADN genòmic per a l'amplificació per verificar la qualitat del cebador i optimitzar el disseny del cebador.

2.Amplificació inespecífica

1) La temperatura de recuit és massa baixa i el nombre de cicle és massa alt.Augmentar la temperatura de recuit i reduir el nombre de cicles;

2) La concentració de plantilla és massa alta.Reduïu la quantitat de plantilla o diluïu la plantilla 10 vegades després de l'amplificació;

3) Poca especificitat del primer.Optimitzar el disseny de la imprimació.

Notes

1.Per evitar la contaminació creuada entre mostres, s'han de preparar múltiples eines de mostreig i la superfície de les eines es pot netejar amb una solució d'hipoclorit de sodi al 2% o un netejador d'àcids nucleics després de cada mostreig si es requereix un ús repetit.

2.Es recomana utilitzar teixits de ratolí frescos i el volum de mostreig no ha de ser massa gran per evitar afectar els resultats de l'amplificació.

3.Lysis Buffer ha d'evitar la congelació-descongelació freqüent i es pot emmagatzemar a 2 ~ 8 ℃ per a un ús múltiple a curt termini.Si s'emmagatzema a baixa temperatura, es pot produir precipitació i s'ha de dissoldre completament abans d'utilitzar-lo.

4.La barreja de PCR ha d'evitar la congelació-descongelació freqüent i es pot emmagatzemar a 4 ℃ per a un ús repetit a curt termini.

5.Aquest producte és només per a la investigació científica experimental i no s'ha d'utilitzar en diagnòstic o tractament clínic.