One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Cat No: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) és un kit de detecció ràpida RT-qPCR basat en sondes adequat per a PCR quantitativa single-plex o multiplex utilitzant ARN com a plantilla (com el virus ARN).Aquest producte utilitza una nova generació d'ADN polimerasa Taq modificada amb anticossos i una transcriptasa inversa dedicada en un sol pas, amb un tampó optimitzat per a una amplificació ràpida, que té una velocitat d'amplificació més ràpida, una major eficiència i especificitat d'amplificació.Admet l'amplificació equilibrada tant en single-plex com multiplex de mostres de concentració baixa i alta en poc temps.
Components
1. 5×RT-qPCR buffer (U+)
2. Mescla d'enzims (U+)
Notes:
a.El tampó 5 × RT-qPCR (U+) inclou dNTP i Mg2+;
b.La barreja enzimàtica (U+) inclou la transcriptasa inversa, l'ADN polimerasa Hot Start Taq, l'inhibidor de la RNasa i la UDG;
c.Utilitzeu puntes sense RNasa, tubs EP, etc.
Abans d'utilitzar, barregeu bé el tampó 5 × RT-qPCR (U+).Si hi ha alguna precipitació després de la descongelació, espereu que el tampó torni a la temperatura ambient, barregeu-lo i dissolgueu-lo i, a continuació, feu servir-los amb normalitat.
Condicions d'emmagatzematge
El producte s'envia amb gel sec i es pot emmagatzemar a -25 ~ -15 ℃ durant 1 any.
Instruccions
1. Reacció Sistema
| Components | Volum (20 μL reacció) |
| 2 × RT-qPCR tampó | 4μl |
| Barreja d'enzims (U+) | 0,8 μl |
| Primer Endavant | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Primer invers | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Sonda TaqMan | 0,05 ~ 0,25 μM |
| Plantilla | X μL |
| Aigua lliure de RNasa | fins a 25 μl |
Notes: el volum de reacció és de 10-50 μL.
2. Protocol de ciclisme (Sestàndard)
| Cicle pas | Temp. | Temps | Cicles |
| Transcripció inversa | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Desnaturalització inicial | 95 ℃ | 30 segons | 1 |
| Desnaturalització | 95 ℃ | 10 segons | 45 |
| Recuit/Extensió | 60 ℃ | 30 segons |
| Protocol de ciclisme (Ràpid) Cicle pas |
Temp. |
Temps |
Cicles |
| Transcripció inversa | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Desnaturalització inicial | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Desnaturalització | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Recuit/Extensió | 60 ℃ | 10 s |
Notes:
a.La temperatura de transcripció inversa és d'entre 50 ℃ i 60 ℃, augmentar la temperatura ajuda a amplificar estructures complexes i plantilles d'alt contingut en CG;
b.La temperatura de recuit òptima s'ha d'ajustar en funció del valor Tm de l'imprimació i seleccionar el temps més curt per a la recollida del senyal de fluorescència basat en l'instrument de PCR en temps real.
Notes
Si us plau, feu servir l'EPI necessari, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat!
