Hotstart Taq DNA polimerasa
Hot Start Taq DNA Polymerase (modificació d'anticossos) és una DNA polimerasa termoestable d'arrencada en calent de Thermus aquaticus YT-1, que posseeix una activitat de polimerasa 5'→3' i una activitat d'endonucleasa de solapa de 5'.L'ADN polimerasa Taq d'inici en calent és una ADN polimerasa Taq modificada per anticossos Taq termolàbils.La modificació d'anticossos va augmentar l'especificitat, la sensibilitat i el rendiment de la PCR.
Components
| Component | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq Buffer | 4 × 1 ml | 4 × 10 ml | 4 × 50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA polimerasa (anticossos modificats) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10 × 5 ml |
Aplicacions
Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 a 25 ℃), KCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, ditiotreitol 1 mM, Tween20 0,5%, IGEPALCA-630 0,5% i glicerol al 50%.
Condició d'emmagatzematge
Transport a menys de 0 °C i emmagatzemat a -25 °C ~ -15 °C.
Definició de la unitat
Una unitat es defineix com la quantitat d'enzim que incorpora 15 nmol de dNTP al material insoluble en àcid en 30 minuts a 75 °C.
Control de qualitat
1.EndActivitat onucleasa:La incubació de 20 U d'enzim amb 4 μg d'ADN pUC19 durant 4 hores a 37 ℃ no va donar lloc a una degradació detectable de l'ADN tal com es determina per electroforesi en gel.
2.PCR Lambda de 5 kb:25 cicles d'amplificació per PCR d'ADN Lambda de 5 ng amb 1,25 unitats d'ADN polimerasa Taq en presència de 200 µM dNTPs i 0,2 µM d'encebadors donen com a resultat el producte esperat de 5 kb.
3.Activitat exonucleasa:La incubació d'una reacció de 50 µl que conté un mínim de 12,5 U d'ADN polimerasa Taq amb 10 nmol d'oligonucleòtid 5´-FAM durant 30 minuts a 37 ℃ no produeix degradació detectable.
4.Activitat RNasa:La incubació de 10 µL de reacció que contenia 20 U d'enzim amb 1 µg de transcripcions d'ARN durant 2 hores a 37 ° C no va provocar una degradació detectable de l'ARN tal com es va determinar mitjançant l'electroforesi en gel.
5.Inactivació per calor:No.
Sistema de reacció
| Components | Volum |
| Plantilla d'ADNa | opcional |
| Primer 10 μM directe | 0,5 μl |
| Primer 10 μM invers | 0,5 μl |
| Barreja dNTP (10 mM cadascun) | 0,5 μl |
| 5 × HC Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA polimerasab(5U/μL) | 0,125 μL |
| Aigua lliure de nucleases | Fins a 25 μL |
Notes:
1) a.
| ADN | Import |
| Genòmica | 1 ng-1 μg |
| Viral o plasmidi | 1 pàg-1 ng |
2) b.La concentració òptima de Taq DNA polimerasa pot oscil·lar entre 5 i 50 unitats/ml (0,1-0,5 unitats/reacció de 25 µL) en aplicacions especialitzades.
Protocol de ciclisme tèrmic
PCR
| Pas | Temperatura(°C) | Temps | Cicles |
| Desnaturalització iniciala | 95 ℃ | 1-3 minuts | - |
| Desnaturalització | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cicles |
| Recuitb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Extensió | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Pròrroga final | 68 ℃ | 5 minuts | - |
Notes:
1) Una desnaturalització inicial d'1 min a 95 °C és suficient per a la majoria de les amplificacions.Per a plantilles difícils, es recomana una desnaturalització més llarga de 2-3 minuts a 95 °C.Amb la PCR de colònies, es recomana una desnaturalització inicial de 5 minuts a 95 °C.
2) El pas de recuit sol ser de 15-60 s.La temperatura de recuit es basa en la Tm del parell d'imprimadors i normalment és de 45-68 ℃.
