Enzims UDG/UNG
L'UDG (uracil DNA glicosilasa) pot catalitzar la hidròlisi de l'enllaç N-glicosídic entre la base d'uracil i l'esquelet de sucre-fosfat en ssDNA i dsDNA.Pot controlar fàcilment la contaminació dels aerosols i és adequat per a sistemes de biologia molecular comuns com ara PCR, qPCR, RT-qPCR i LAMP.
Especificacions
| Amfitrió d'expressió | E. coli recombinant amb el gen de l'ADN glicosilasa d'uracil |
| Pes molecular | 24. 8kDa |
| Puresa | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inactivació per calor | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Definició de la unitat | Una unitat (U) es defineix com la quantitat d'enzim necessària per catalitzar la hidròlisi d'ADNdc que conté 1 μg dU en 30 minuts a 25 ℃. |
Emmagatzematge
El producte s'ha d'emmagatzemar a -25 ℃ ~ -15 ºC durant dos anys.
Instruccions
1.Preparació de la mescla de reacció PCR segons el sistema següent
| Components | Volum (μl) | Concentració final |
| 10 × tampó PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/lixiviació) | 1 | 0,2 mmol/lixiviació |
| Plantilla d'ADN | X | - |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA polimerasa (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| ADN glicosilasa d'uracil (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Fins a 50 | - |
Nota: Segons els requisits experimentals, la concentració final de dUTP es pot ajustar entre 0,2-0,6 mmol/L i es pot afegir selectivament 0,2 mmol/L dTTP.
2.Procediment d'amplificació
| Pas de cicle | Temperatura | Temps | Cicles |
| Degradació de plantilla que conté dU | 25℃ | 10 minuts | 1 |
| Activació UDG, desnaturalització inicial de plantilla | 95℃ | 5 ~ 10 minuts | 1 |
| Desnaturalització | 95℃ | 10 segons |
30-35 |
| Recuit | 60℃ | 20 segons | |
| Extensió | 72℃ | 30 segons/kb | |
| Pròrroga final | 72℃ | 5 min | 1 |
Nota: El temps de reacció a 25 °C es pot ajustar en 5-10 minuts segons els requisits experimentals.
Notes
1.UDG està actiu a la majoria de tampons de reacció de PCR.
2.Els enzims s'han d'emmagatzemar en una nevera o en un bany de gel quan s'utilitzen, i s'han d'emmagatzemar a -20 °C immediatament després de l'ús.
3.Si us plau, feu servir l'EPI necessari, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat!
