Premescla universal SYBR GREEN qPCR (blau)

Cat No: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (basat en colorants) és una solució prèvia per a l'amplificació quantitativa de PCR 2 × en temps real caracteritzada per una alta sensibilitat i especificitat, és de color blau i té l'efecte de traçar l'addició de mostres.El component central Taq DNA polimerasa utilitza un inici calent d'anticossos per inhibir eficaçment l'amplificació inespecífica a causa del recuit de l'imprimació durant la preparació de la mostra.Al mateix temps, la fórmula afegeix els factors promotors per millorar l'eficiència d'amplificació de la reacció de PCR i igualar l'amplificació de gens amb diferents continguts de GC (30 ~ 70%), de manera que la PCR quantitativa pot obtenir una bona relació lineal en una àmplia quantitat quantitativa. regió.Aquest producte conté colorant especial de referència passiva ROX, que s'aplica a la majoria d'instruments de qPCR.No cal ajustar la concentració de ROX en diferents instruments.Només cal afegir cebadors i plantilles per preparar el sistema de reacció per a l'amplificació.

Components

Universal Blue qPCR Master Mix

Condicions d'emmagatzematge

El producte s'envia amb paquets de gel i es pot emmagatzemar a -25 ℃ ~ -15 ℃ durant 18 mesos.Cal evitar una irradiació de llum forta quan s'emmagatzema o es prepara el sistema de reacció.

Especificació

Instruccions

1.Sistema de reacció

[Nota]: Barregeu bé abans d'utilitzar per evitar bombolles excessives per sacsejades vigoroses.

a) Concentració d'imprimació: La concentració final d'imprimació és de 0,2 μmol/L, i també es pot ajustar entre 0,1 i 1,0 μmol/L segons correspongui.

b) Concentració de plantilla: si la plantilla és una solució d'ADNc sense diluir, el volum utilitzat no hauria de superar 1/10 del volum total de la reacció qPCR.

c) Dilució de la plantilla: Es recomana diluir la solució d'ADNc entre 5 i 10 vegades.La quantitat òptima de plantilla afegida és millor quan el valor de Ct obtingut per amplificació és de 20-30 cicles.

d) Sistema de reacció: Es recomana utilitzar 20μL o 50μL per garantir l'eficàcia i la repetibilitat de l'amplificació del gen objectiu.

e) Preparació del sistema: si us plau, prepareu-vos al banc super net i utilitzeu les puntes i els tubs de reacció sense residus de nucleases;es recomana utilitzar les puntes amb cartutxos de filtre.Eviteu la contaminació creuada i la contaminació per aerosols.

2.Programa de reacció

Programa estàndard

Programa ràpid

[Nota]: el programa ràpid és adequat per a la gran majoria de gens i es poden provar programes estàndard per a gens d'estructura secundària complexa individuals.

a) Temperatura i temps de recuit: si us plau, ajusteu-lo segons la longitud de l'encebador i el gen objectiu.

b) Adquisició del senyal de fluorescència (★): estableixi el procediment experimental segons els requisits de les instruccions d'ús de l'instrument.

c) Corba de fusió: el programa predeterminat de l'instrument es pot utilitzar normalment.

3. Anàlisi de resultats 

Es van requerir un mínim de tres rèpliques biològiques per a experiments quantitatius.Després de la reacció, cal confirmar la corba d'amplificació i la corba de fusió.

3.1 Corba d'amplificació:

La corba d'amplificació estàndard té forma de S.L'anàlisi quantitativa és més precisa quan el valor Ct cau entre 20 i 30. Si el valor Ct és inferior a 10, cal diluir la plantilla i tornar a realitzar la prova.Quan el valor de Ct està entre 30 i 35, és necessari augmentar la concentració de plantilla o el volum del sistema de reacció, per millorar l'eficiència de l'amplificació i garantir la precisió de l'anàlisi dels resultats.Quan el valor Ct és superior a 35, els resultats de la prova no poden analitzar quantitativament l'expressió del gen, però es poden utilitzar per a l'anàlisi qualitativa.

3.2 Corba de fusió:

L'únic pic de la corba de fusió indica que l'especificitat de la reacció és bona i es pot realitzar una anàlisi quantitativa;si la corba de fusió mostra pics dobles o múltiples, no es pot realitzar una anàlisi quantitativa.La corba de fusió mostra pics dobles, i cal jutjar si el pic no objectiu és un dímer d'imprimació o una amplificació inespecífica mitjançant electroforesi en gel d'agarosa d'ADN.Si es tracta d'un dímer d'imprimació, es recomana reduir la concentració d'imprimació o redissenyar els imprimadors amb una alta eficiència d'amplificació.Si es tracta d'una amplificació inespecífica, augmenteu la temperatura de recuit o redissenyeu els primers amb especificitat.

Notes

Si us plau, feu servir l'EPI necessari, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat!

Aquest producte és només per a ús d'investigació!