DNasa I (lliure de rnasa) (5u/ul)
Cat No: HC4007A
La DNasa I (desoxiribonucleasa I) és una endodesoxiribonucleasa que pot digerir ADN de cadena simple o doble.Reconeix i escinda enllaços fosfodièster per produir monodesoxinucleòtids o oligodesoxinucleòtids de cadena simple o doble amb grups fosfat al terminal 5' i hidroxil al terminal 3'.L'activitat de la DNasa I depèn del Ca2+i pot ser activat per ions metàl·lics divalents com el Mn2+i Zn2+.5 mM Ca2+protegeix l'enzim de la hidròlisi.En presència de Mg2+, l'enzim podria reconèixer i escindir aleatòriament qualsevol lloc de qualsevol cadena d'ADN.En presència de Mn2+, les cadenes dobles d'ADN es poden reconèixer i escindir simultàniament en gairebé el mateix lloc per formar fragments d'ADN d'extrem pla o fragments d'ADN d'extrem enganxós amb 1-2 nucleòtids que sobresurten.
Components
| Nom | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNasa I, lliure de RNasa | 20μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| Tampó 10×DNasa I | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Condicions d'emmagatzematge
-25 ℃ ~ -15 ℃ per a l'emmagatzematge;Transport sota paquets de gel.
Instruccions
1. Prepareu la solució de reacció al tub sense RNasa segons les proporcions que s'indiquen a continuació:
| Component | Volum |
| ARN | X µg |
| 10 × DNasa I tampó | 1μl |
| DNasa I, lliure de RNasa (5U/μL) | 1 U per µg d'ARN① |
| ddH2O | Fins a 10μL |
Nota: ①Calculeu el volum de DNasa I que cal afegir en funció de la quantitat d'ARN.
2. 37 ℃ durant 15 minuts;
3. Afegiu EDTA 0,5 M a la concentració final de 2,5 mM ~ 5 mM i escalfeu a 65 ℃ durant 10 minuts per aturar la reacció.La mostra es pot utilitzar directament per a la següent reacció, com ara la transcripció inversaexperiment.
Definició de la unitat
Una unitat es defineix com la quantitat d'enzim que degradarà completament 1 µg de pBR322ADN en 10 minuts a 37℃.
Control de qualitat
RNasa:5U de DNasa I amb 1,6 µg d'ARN MS2 durant 4 hores a 37 ℃ no produeixen degradació ja quedeterminat per electroforesi en gel d'agarosa.
Notes
1. Si us plau, prepareu 0,5 MEDTA per vosaltres mateixos.
2. Utilitzeu 1U DNasa I per µg d'ARN.Tanmateix, si l'ARN és inferior a 1 µg, utilitzeu 1U DNasa I.
3. Col·loqueu l'enzim sobre gel durant el funcionament.
