Kit d'extracció d'ADN/ARN viral
Aquest kit és adequat per a l'extracció ràpida d'ADN/ARN viral d'alta puresa a partir de mostres com hisops nasofaríngs, hisops ambientals, sobrenedants de cultiu cel·lular i sobrenedants d'homogeneïtat de teixits.El kit es basa en la tecnologia de purificació de membrana de sílice que elimina la necessitat d'utilitzar dissolvents orgànics de fenol/cloroform o la precipitació d'alcohol que requereix temps per extreure ADN/ARN viral d'alta qualitat.Els àcids nucleics obtinguts estan lliures d'impureses i estan preparats per al seu ús en experiments posteriors com ara transcripció inversa, PCR, RT-PCR, PCR en temps real, seqüenciació de propera generació (NGS) i Northern blot.
Condicions d'emmagatzematge
Emmagatzemar a 15 ~ 25 ℃ i transportar a temperatura ambient
Components
| Components | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| DdH2 O lliure de RNasa | 6 ml |
| Columnes d'ARN FastPure | 100 |
| Tubs de recollida (2 ml) | 100 |
| Tubs de recollida sense RNases (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Proporcionar un entorn per a la lisi i la unió.
Buffer RW:Elimina les proteïnes residuals i altres impureses.
DdH2O lliure de RNasa:Eluir l'ADN/ARN de la membrana de la columna de spin.
Columnes d'ARN FastPure:Concretament adsorbeix ADN/ARN.
Tubs de recollida 2 ml:Recollir el filtrat.
Tubs de recollida sense RNases 1,5 ml:Recull ADN/ARN.
Aplicacions
Hisopos nasofaríngs, hisops ambientals, sobrenedants de cultiu cel·lular i sobrenedants d'homogeneïtat de teixits.
Mater autopreparatials
Puntes de pipeta sense RNasa, tubs de centrífuga sense RNasa d'1,5 ml, centrífuga, mesclador de vòrtex i pipetes.
Procés d'experimentació
Realitzeu tots els passos següents en un armari de bioseguretat.
1. Afegiu 200 μl de la mostra a un tub de centrífuga lliure de RNasa (completar amb PBS o NaCl al 0,9% en cas de mostra insuficient), afegiu 500 μl de Buffer VL, barregeu bé amb vortex durant 15 – 30 segons i centrifugueu. breument per recollir la mescla al fons del tub.
2. Col·loqueu les columnes d'ARN FastPure en tubs de recollida de 2 ml.Transferiu la barreja del pas 1 a les columnes d'ARN FastPure, centrifugueu a 12.000 rpm (13.400 × g) durant 1 min i descarteu el filtrat.
3. Afegiu 600 μl de Buffer RW a FastPure RNA Columns, centrifugueu a 12.000 rpm (13.400 × g) durant 30 segons i descarteu el filtrat.
4. Repetiu el pas 3.
5. Centrifugueu la columna buida a 12.000 rpm (13.400 × g) durant 2 min.
6. Transferiu amb cura les columnes d'ARN FastPure a un nou tub de recollida sense RNasa d'1,5 ml (proporcionat al kit) i afegiu 30 – 50 μl de ddH2O sense RNasa al centre de la membrana sense tocar la columna.Deixeu reposar a temperatura ambient durant 1 min i centrifugueu a 12.000 rpm (13.400 × g) durant 1 min.
7. Descarta les columnes d'ARN FastPure.L'ADN/ARN es pot utilitzar directament per a assaigs posteriors o emmagatzemar-se a -30 ~ -15 °C durant un període curt o -85 ~ -65 °C durant un període més llarg.
Notes
Només per a ús d'investigació.No s'utilitza en procediments de diagnòstic.
1. Equilibre les mostres a temperatura ambient amb antelació.
2. Els virus són altament infecciosos.Assegureu-vos que es prenen totes les precaucions de seguretat necessàries abans de l'experiment.
3. Eviteu la congelació i descongelació repetida de la mostra, ja que això pot provocar la degradació o la reducció del rendiment de l'ADN/ARN viral extret.
4. L'equip d'autopreparació inclou puntes de pipeta sense RNasa, tubs de centrífuga sense RNasa d'1,5 ml, centrífuga, mesclador de vòrtex i pipetes.
5. Quan utilitzeu el kit, feu servir una bata de laboratori, guants de làtex d'un sol ús i una màscara d'un sol ús i utilitzeu consumibles sense RNases per minimitzar el risc de contaminació amb RNases.
6. Realitzeu tots els passos a temperatura ambient tret que s'especifiqui el contrari.
Mecanisme i flux de treball
