Grau Ultra Nuclease GMP
Cat No: HC2016A
El grau UltraNuclease GMP s'expressa i purifica a Escherichia coli (E.coli) mitjançant enginyeria genètica i preparada sota els entorns GMP.Pot reduir la viscositat del sobrenedant cel·lular i del lisat cel·lular en la investigació científica, augmentar l'eficiència de purificació de proteïnes i millorar la investigació funcional de proteïnes.El producte també pot reduir els residus d'àcid nucleic hoste a grau pg, millorant el rendiment i la seguretat dels productes biològics d'aplicacions com la purificació de virus, la fabricació de vacunes i la fabricació farmacèutica de proteïnes/polisacàrids.A més, el producte també es pot aplicar per evitar l'aglomeració de cèl·lules mononuclears de sang perifèrica humana (PBMC) en la teràpia cel·lular i el desenvolupament de vacunes.
UltraNuclease es proporciona en forma de reactiu esterilitzat, eluït en tampó (20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50% glicerina), amb l'aspecte d'un líquid transparent incolor.Aquest producte es produeix segons els requisits del procés GMP i es proporciona en forma líquida.
Components
Grau UltraNuclease GMP (250 U/μL)
Condicions d'emmagatzematge
El producte s'envia amb gel sec i es pot emmagatzemar a -25 ℃ ~ -15 ° C durant dos anys.
Si el producte s'obre i s'ha emmagatzemat a 4 ℃ durant més d'una setmana, recomanem filtrarel producte per evitar la contaminació microbiana.
Especificacions
| Amfitrió d'expressió | E. coli recombinant amb el gen UltraNuclease |
| Pes molecular | 26,5 kDa |
| punt soelèctric | 6,85 |
| Puresa | ≥99% (SDS-PAGE) |
| Buffer d'emmagatzematge | Tris-HCL 20 mM pH 8,0, MgCl 2 mM, NaCl 20 mM, glicerina al 50% |
|
Definició de la unitat | La definició d'una unitat d'activitat (U) és la quantitat d'enzim utilitzadacanvieu el valor d'absorció de ΔA260 en 1,0 en 30 minuts en 2,625 mLsistema de reacció a 37 ℃ amb un pH de 8,0 (equivalent a la digestió completa de37 μg d'ADN d'esperma de salmó en oligonucleòtids). |
Instruccions
1. Mostra Col · lecció
Cèl·lules adherents: treure el medi, rentar les cèl·lules amb PBS i eliminar el sobrenedant.
Cèl·lules de suspensió: recollir les cèl·lules per centrifugació, rentar les cèl·lules amb PBS, centrifugar a 6.000rpm durant 10 min, recollir el pellet.
Escherichia coli: recollir els bacteris per centrifugació, rentar una vegada amb PBS, centrifugar a 8.000rpm durant 5 min i recollir el pellet.
2. Tractament de la mostra
Tracteu els pellets de cèl·lules recollides amb tampó de lisi en la proporció de massa (g) a volum (mL) 1: (10-20), o per mètodes mecànics o químics sobre gel o a temperatura ambient (1 g de pellet cel·lular conté aproximadament
109 cel·les).
3. Tractament enzimàtic
Afegiu 1-5 mM de MgCl al sistema de reacció i ajusteu el pH a 8-9.
Afegiu UltraNuclease segons la proporció de 250 unitats per digerir 1 g de pellets cel·lulars, incubar a 37 ℃ durant més de 30 minuts.Consulteu el formulari "Temps de reacció recomanat" per triar-lodurada del tractament.
4. Sobrenedant Col · lecció
Centrifugar a 12.000 rpm durant 30 minuts i recollir el sobrenedant.
Nota: si la solució és àcida o alcalina, o conté altes concentracions de sal, detergents odesnaturalitzants, si us plau, augmenti la dosi d'enzims o allarga el temps de tractament en conseqüència.
Condicions de reacció recomanadesons
| Paràmetre | Condició òptima | Condicionador efectiu |
| Mg²+concentració | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperatura | 37℃ | 0-42 ℃ |
| Concentració de TDT | 0-100 mM | > 0 mM |
| Concentració de mercaptoetanol | 0-100 mM | > 0 mM |
| Concentració de cations monovalents | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Concentració de fosfats | 0-10 mM | 0-100 mM |
Recomanat Reacció Temps (37 ℃, 2 mM Mg²+, pH 8,0)
| Quantitat d'ultranucleases (concentració final) | Temps de reacció |
| 0,25 U/ml | >10 h |
| 2,5 U/ml | > 4h |
| 25 U/ml | 30 min |
Notes:
Si us plau, feu servir l'EPI necessari, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat!
