Sensible a la temperatura UNG
L'UNG sensible a la temperatura (TS-UNG) s'obté per expressió recombinant en E. coli.L'enzim catalitza l'alliberament d'uracil lliure a partir de l'ADN de cadena simple i doble que conté uracil i és inactiu contra l'ARN.En comparació amb l'enzim UNG convencional d'origen del gen E. coli, l'enzim TS-UNG té una activitat més alta a baixes temperatures (20 ℃ ~ 37 ℃) i és sensible a la temperatura i s'inactiva fàcilment (50 ℃), evitant la degradació de l'amplificació que conté dUTP. productes a temperatura ambient per l'activitat residual que pot romandre després de la inactivació de l'enzim UNG convencional.Per tant, l'enzim TS-UNG no només és adequat per a la reacció de prevenció de la contaminació per PCR, sinó que també coincideix bé amb el programa d'amplificació RT-PCR i es pot utilitzar en la reacció de prevenció de la contaminació per RT-PCR.
Aplicació recomanada
Prevenció de la contaminació Amplificació
Condició d'emmagatzematge
-20 °C per a l'emmagatzematge a llarg termini, s'ha de barrejar bé abans d'utilitzar, evitar la congelació-descongelació freqüent.
Buffer d'emmagatzematge
Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), NaCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, estabilitzador, glicerol al 50%.
Definició de la unitat
La quantitat d'enzim necessària per degradar 1 µg d'ADN monocatenari que conté bases dU en 1 hora a 37 °C és 1 unitat d'activitat (U).
Control de qualitat
1.Puresa electroforètica SDS-PAGE superior al 98%
2.Activitat de degradació, control lot a lot, estabilitat
3.No hi ha activitat nucleasa exògena, no hi ha contaminació amb endonucleases exògenes o exonucleases.
Instruccions
| Components | Volum (μl) | Concentració final |
| 10 × tampó PCR (sense dNTP, Mg²+gratuït) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (substitueix dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM de MgCl2 | 2-8 μl | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Plantilla | - | <1 μg/reacció |
| ddH₂O | Fins als 50 | - |
Nota: a: Si s'utilitza per a qPCR/qRT-PCR, la sonda fluorescent s'ha d'afegir al sistema de reacció.Normalment, una concentració final d'imprimació de 0,2 μM pot donar bons resultats;quan el rendiment de la reacció és baix, la concentració d'imprimació es pot ajustar en el rang de 0,2-1 μM.Normalment, la concentració de la sonda s'optimitza en el rang de 0,1-0,3 μM.Es poden realitzar experiments de gradient de concentració per trobar la millor combinació d'imprimació i sonda.
Notes
1.La temperatura de reacció òptima de l'enzim TS-UNG és relativament baixa i es pot optimitzar en el rang de 20 ℃ ~ 37 ℃, la dosi de l'enzim i el temps de reacció es poden optimitzar en el rang de 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;i l'enzim es pot inactivar en el procés de transcripció inversa.
2.És adequat per a PCR i RT-PCR per evitar la contaminació.
3.Eviteu la congelació-descongelació freqüent i no exposeu a grans fluctuacions de temperatura.
4.Els diferents gens que s'han d'amplificar tenen una eficiència d'utilització diferent de dUTP i sensibilitat a l'enzim UNG, per tant, si l'ús del sistema UNG condueix a una disminució de la sensibilitat de detecció, el sistema de reacció s'ha d'ajustar i optimitzar, si necessiteu suport tècnic, poseu-vos en contacte amb la nostra companyia.
