RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Aquest producte conté tampó de reacció, barreja d'enzims RT (ADN polimerasa Bst i transcriptasa inversa resistent a la calor), protectors liofilitzats i components de colorants cromogènics.Per utilitzar-lo, només cal que utilitzeu Buffer, l'enzim de reacció i l'imprimació es barregen i s'afegeixen a la plantilla;afegir un protector liofilitzat pot ser recte.Es va connectar a un liofilitzador i es va liofilitzar, i només es van afegir els primers i les plantilles quan es van utilitzar.Aquest kit proporciona una detecció visual ràpida i clara de l'amplificació, quina reacció negativa s'indica en vermell i la reacció positiva s'indica amb un canvi al groc.
Component
| Component | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Tampó d'amplificació mediat per bucle (amb colorant) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| Barreja d'enzims RT | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Protector liofilitzat | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Aplicacions
Per a l'amplificació isotèrmica d'ADN o ARN.
Condicions d'emmagatzematge
Transportat amb gel sec, emmagatzemat a -25 ~ -15 ℃.Eviteu la congelació-descongelació freqüent, el producte té una validesa de 12 mesos.
Protocol
1.Descongelar el tampó de reacció que s'utilitzarà a temperatura ambient.Agitar breument o invertir els tubs diverses vegades per barrejar-los bé i, a continuació, centrifugar per recollir el líquid al fons del tub.
2.Preparació del sistema de reacció.Aquest reactiu es pot preparar en dos sistemes de reacció, una barreja de reacció líquida i una barreja de sistema liofilitzat.
1) Preparar la barreja de reacció líquida
| Component | Volum |
| Tampó d'amplificació mediat per bucle (amb colorant) | 10 μl |
| Barreja d'enzims RT | 2,8 μl |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Plantilles ADN/ARN b | × μL |
| Aigua lliure de nucleases | Fins a 50 μL |
2) Barreja de sistema de liofilització
① Prepareu la barreja liofilitzada
| Component | Volum |
| Tampó d'amplificació mediat per bucle (amb colorant) | 10 μl |
| Protector liofilitzat | 20 μl |
| Barreja d'enzims RT | 2,8 μl |
| Aigua lliure de nucleases | Fins a 50 μL |
② Liofilització: la barreja preparada es va liofilitzar en un sistema de 50 μL
③ Prepareu la barreja de reacció
| Component | Volum |
| Mescla liofilitzada | 1 peça |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Plantilles ADN/ARN b | × μL |
| Aigua lliure de nucleases | Fins a 50 μL |
Notes:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (soluble en aigua) es recomana per a l'àcid nucleic templ.
1.Incubar a 65 °C durant 30-45 minuts, que es pot allargar adequadament segons el canvi de color Temps de reacció.
2.Segons l'ull nu, el groc era positiu i el vermell era negatiu.
Notes
1.La sal pot aparèixer a la part inferior del tub tampó, vortex breument o invertir els tubs diverses vegades per barrejar bé a temperatura ambient.
2.La temperatura de reacció es pot optimitzar entre 62 ℃ i 68 ℃ segons l'estat dels imprimadors.
3.Els reactius envasats no s'han d'exposar a l'aire durant molt de temps.
4.La reacció de decoloració vermella i groga depèn del canvi de pH del sistema de reacció, si us plau, no utilitzeu la solució d'emmagatzematge d'àcid nucleic Tris que conté, recomanada per utilitzar ddH2O àcid nucleic emmagatzemat;
5.L'experiment s'ha d'estandarditzar, incloent la preparació del sistema de reacció, la liofilització i el processament de la mostra i el procés d'addició de mostres;
6.Per evitar la contaminació, es recomana preparar el sistema de reacció en un banc ultra net, en altres Afegir plantilles a la campana de l'habitació per evitar falses interferències positives.
