Robustart Taq DNA polimerasa

Robustart Taq DNA Polymerase és una DNA polimerasa d'inici en calent.Aquest producte no només pot inhibir millor la reacció inespecífica causada pel recuit inespecífic dels primers o l'agregació d'encebadors en el procés de preparació i amplificació del sistema de PCR.Per tant, té una especificitat excel·lent i és més eficaç per a l'amplificació de plantilles de baixa concentració, i és adequat per a la reacció d'amplificació de PCR multiplexada.A més, aquest producte té molt bona aplicabilitat i es poden obtenir resultats d'amplificació estables en diferents tipus de reaccions de PCR.

Components

1.5 U/μL ADN polimerasa Robustart Taq

2.10 × PCR Buffer II (lliure de Mg²+) (opcional)

3.25 mM de MgCl₂(opcional)

* 10 × PCR Buffer II (lliure de Mg²+) no conté dNTP i Mg²+, afegiu dNTP i MgCl₂en preparar el sistema de reacció.

Aplicacions recomanades

1.Amplificació ràpida.

2.Amplificació múltiple.

3.Amplificació directa de sang, hisops i altres mostres.

4.Detecció de malalties respiratòries.

Condició d'emmagatzematge

-20 °C per a l'emmagatzematge a llarg termini, s'ha de barrejar bé abans d'utilitzar, evitar la congelació-descongelació freqüent.

*Si la precipitació es produeix després de la refrigeració, és normal;es recomana equilibrar a temperatura ambient abans de barrejar i utilitzar.

Definició de la unitat

Una unitat activa (U) es defineix com la quantitat d'enzim que incorpora 10 nmol de desoxiribonucleòtid a material insoluble en àcid a 74 °C durant 30 minuts utilitzant l'ADN d'esperma de salmó activat com a plantilla/imprimador.

Control de qualitat

1.Puresa electroforètica SDS-PAGE superior al 98%.

2.Sensibilitat d'amplificació, control de lot a lot, estabilitat.

3.No hi ha activitat nucleasa exògena, no hi ha contaminació amb endonucleases exògenes o exonucleases

Instruccions

Configuració de la reacció

Notes:

1) a.El buffer no conté dNTP i Mg²+, si us plau, afegiu dNTP i MgCl₂en preparar el sistema de reacció.

2) b.Si s'utilitza per a qPCR/qRT-PCR, s'han d'afegir sondes fluorescents al sistema de reacció.Normalment, una concentració final d'imprimació de 0,2 μM donarà bons resultats;si el rendiment de la reacció és baix, la concentració d'imprimació es pot ajustar en el rang de 0,2-1 μM.La concentració de la sonda normalment s'optimitza en el rang de 0,1-0,3 μM.Es poden realitzar experiments de gradient de concentració per trobar la millor combinació d'imprimació i sonda.

Protocol de ciclisme tèrmic

Notes

1.La velocitat d'amplificació de l'ADN polimerasa ràpida no ha de ser inferior a 1 kb/10 s.La taxa d'augment i descens de la temperatura, el mode de control de la temperatura i l'eficiència de conducció de calor dels diferents instruments de PCR varien molt, per la qual cosa es recomana optimitzar les condicions de reacció òptimes per a l'instrument de PCR ràpid específic.

2.El sistema és altament adaptable, amb major especificitat i sensibilitat.

3.Adequat per al seu ús com a reactius de detecció de PCR d'alta sensibilitat i es pot utilitzar en reaccions d'amplificació de PCR multiplex.

4.Activitat 5′→3′ polimerasa, activitat 5′→3′ exonucleasa;no hi ha activitat exonucleasa 3′→5′;sense funció de correcció.

5.Apte per a proves qualitatives i quantitatives de PCR i RT-PCR.

6.L'extrem 3′ del producte de la PCR és A, que es pot clonar directament en un vector T.

7.El mètode de tres passos es recomana per a cebadors amb temperatures de recuit baixes o per a l'amplificació de fragments de més de 200 pb.