Rnasa A
La ribonucleasa A (RNasaA) és un polipèptid monocatenari que conté 4 enllaços disulfur amb un pes molecular d'uns 13,7 kDa.La RNasa A és una endoribonucleasa que degrada específicament l'ARN monocatenari en els residus C i U.Concretament, l'escissió reconeix l'enllaç fosfodièster format per la 5'-ribosa d'un nucleòtid i el grup fosfat de la 3'-ribosa del nucleòtid de pirimidina adjacent, de manera que els 2, 3'-fosfats cíclics s'hidrolitzen als 3 corresponents. ′nucleòsids fosfats (per exemple, pG-pG-pC-pA-pG és escindit per la RNasa A per generar pG-pG-pCp i A-PG).La RNasa A és la més activa en l'escissió de l'ARN monocatenari.La concentració de treball recomanada és d'1-100 μG/mL, compatible amb diversos sistemes de reacció.Es pot utilitzar una concentració baixa de sal (0-100 mM NaCl) per tallar ARN monocatenari, ARN doble cadena i cadenes d'ARN formades per hibridació ARN-ADN.Tanmateix, a una concentració de sal elevada (≥0, 3 M), la RNasa A només escinda específicament l'ARN monocatenari.
La RNasa A s'utilitza més habitualment per eliminar l'ARN durant la preparació de l'ADN plasmidi o de l'ADN genòmic. Si la DNasa està activa o no durant el procés de preparació pot afectar fàcilment la reacció.El mètode tradicional d'ebullició en un bany maria es pot utilitzar per inactivar l'activitat de la DNasa.Aquest producte no conté DNasa ni proteasa, i no requereix tractament tèrmic abans de l'ús.A més, aquest producte també es pot utilitzar en experiments de biologia molecular com l'anàlisi de protecció de la RNasa i l'anàlisi de la seqüència d'ARN.
Condicions d'emmagatzematge
El producte es pot emmagatzemar a -25~-15℃, vàlid durant 2 anys.
Instruccions
Aquest és un dels mètodes habituals per preparar la solució d'emmagatzematge de la RNasa A.També es pot preparar peraltres mètodes segons els mètodes tradicionals del laboratori o de la literatura de referència (com aradissolt directament en Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 o solució de Tris-NaCl)
1. Utilitzeu acetat de sodi 10 mM (pH 5,2) per preparar 10 mg/mL de solució d'emmagatzematge de RNasa A
2. Escalfament a 100 ℃ durant 15 min
3. Refredar a temperatura ambient, afegir 1/10 de volum de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), ajustar el seu pH a 7,4 (per aexemple, afegiu 500 ml de solució d'emmagatzematge de RNasa 10 g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sub-envasat a -20 ℃ per a l'emmagatzematge congelat, que pot ser estable fins a 2 anys.
[Notes]: en bullir la solució de RNasa A en condicions neutres, es formarà precipitació de RNasa;Bulliu-lo a un pH més baix, i si hi ha precipitació es pot observar, que pot ser provocat per la presència d'impureses proteiques.Si es troben sediments després de l'ebullició, les impureses es poden eliminar mitjançant una centrifugació d'alta velocitat (13.000 rpm) i després subenvasar-les per a l'emmagatzematge per congelació.
Informació del producte
| Sinònims | ribonucleasa I;ribonucleasa pancreàtica;Ribonucleasa 3'-pirimidnooligonucleotidohidrolasa;Rnasa A;Endoribonulceasi I |
| CAS Núm. | 9001-99-4 |
| Aparença | Pols liofilitzat blanc |
| Pes molecular | ~ 13,7 kDa (seqüència d'aminoàcids) |
| Valor Ph | 7.6 (interval d'activitat 6-10) |
| Temperatura adequada | 60 ℃ (rang d'activitat 15-70 ℃) |
| Agent activador | Na2+.K+ |
| Inhibidor | Inhibidor de rnasa |
| Mètode d'inactivació | No es pot inactivar per escalfament, es recomana utilitzar una columna centrífuga |
| Origen | Boví |
| Solubilitat | Soluble en aigua (10 mg/ml) |
| Pèrdua en sec | ≤5,0% |
| Activitat enzimàtica | ≥60 unitats Kunitz/mg |
| Punt isoelèctric | 9.6 |
Notes
Per a la vostra seguretat i salut, feu servir bates de laboratori i guants d'un sol ús per operar.
