Fosfatasa alcalina (ALP)
Descripció
La fosfatasa alcalina es deriva d'una soca d'E. coli recombinant que porta el gen TAB5.L'enzim catalitza la desfosforilació dels extrems 5' i 3' dels fosfomonoèsters d'ADN i ARN.A més, hidrolitza la ribosa, així com els desoxiribonucleòsids trifosfats (NTPs i dNTPs).La fosfatasa alcalina TAB5 actua sobre els extrems de 5' sobresortint, 5' encastats i roms.La fosfatasa es pot utilitzar en moltes aplicacions de biologia molecular, com ara la clonació o l'etiquetatge dels extrems de la sonda per eliminar els extrems fosforilats de l'ADN o l'ARN.En els experiments de clonació, la desfosforilació impedeix que l'ADN plasmidi linealitzat s'autolligui.També pot degradar dNTP no incorporats en reaccions de PCR per preparar una plantilla per a la seqüenciació d'ADN.L'enzim s'inactiva de manera completa i irreversible escalfant-se a 70 °C durant 5 minuts, fent que no sigui necessària l'eliminació de la fosfatasa abans de la lligadura o l'etiquetatge final.
Ús
1.La fosfatasa alcalina acoblada a proteïnes (anticossos, estreptavidina, etc.) pot identificar específicament les molècules diana i es pot utilitzar en ELISA, WB i detecció histoquímica;
2.La fosfatasa alcalina es pot utilitzar per desfosforitzar el terminal 5' de l'ADN o l'ARN per evitar l'autoenllaç;
3. L'ADN o ARN desfosforilat anterior es pot marcar amb fosfats radiomarcats (mitjançant la polinucleòtid quinasa T4)
Estructura química
Especificació
| Elements de prova | Especificacions |
| Activitat enzimàtica | 5U/μL |
| Activitat de les endonucleases | No detectat |
| Activitat exonucleasa | No detectat |
| Activitat de Nicking | No detectat |
| Activitat RNasa | No detectat |
| ADN d'E.coli | ≤1 còpia/5U |
| Endotoxina | Prova LAL, ≤10EU/mg |
| Puresa | ≥95% |
Transport i emmagatzematge
Transport:Ambient
Emmagatzematge :Emmagatzemar a 2-8 °C
Reprovació recomanadaVida:2 anys
