Peroxidasa (font de rave picant) Sinònim: peròxid d'hidrogen oxidoreductasa;HRP
Descripció
La peroxidasa de rave picant (HRP) està aïllada de les arrels del rave picant (Amoracia rusticana) i pertany al grup de les ferroprotoporfirines de les peroxidases.HRP es combina fàcilment amb peròxid d'hidrogen (H2O2).El complex [HRP-H2O2] resultant pot oxidar una gran varietat de donants d'hidrogen:
Donant + H2O2 → Donant oxidat + 2 H2O
L'HRP oxidarà diversos substrats (vegeu la taula 1):
• Cromogènics
• Quimioluminiscents (com ara luminol o isoluminol)
• Fluorogènic (com ara tiramina, àcid homovanil·lic o àcid 4-hidroxifenil acètic)
HRP és un polipèptid de cadena única que conté quatre ponts disulfur.HRP és una glicoproteïna que conté un 18% d'hidrats de carboni.La composició d'hidrats de carboni consta de galactosa, arabinosa, xilosa, fucosa, manosa, manosamina i galactosamina, depenent de la isoenzima específica.
L'HRP és una etiqueta àmpliament utilitzada per a immunoglobulines en moltes aplicacions d'immunoquímica diferents, com ara immunoblot, immunohistoquímica i ELISA.L'HRP es pot conjugar amb anticossos mitjançant diversos mètodes diferents, inclòs el glutaraldehid, l'oxidació del periodat, mitjançant enllaços disulfur i també mitjançant enllaços reticulats dirigits a amino i tiol.L'HRP és el marcador més desitjat per als anticossos, ja que és el més petit i més estable dels tres marcadors enzimàtics més populars (peroxidasa, β-galactosidasa, fosfatasa alcalina) i la seva glicosilació condueix a una menor unió inespecífica.S'ha publicat una revisió dels mètodes de conjugació de glutaraldehid i periodat.
La peroxidasa també s'utilitza per a la determinació de glucosa4 i peròxids en solució.Diverses publicacions, 6-24 tesis, 25-29 i dissertacions 30-46 han citat l'ús de P8375 en els seus protocols de recerca.
Estructura química
Especificació
Elements de prova | Especificacions |
Descripció | Pols amorf de color marró vermellós, liofilitzat |
Activitat | ≥100U/mg |
Puresa (SDS-PAGE) | ≥90% |
Solubilitat (10 mg en pols/ml) | Clar |
Enzims contaminants | |
NADH/NADPH oxidasa | ≤0,1% |
Catalase | ≤0,005% |
ATPasa | ≤0,03% |
Transport i emmagatzematge
Transport:Enviament a menys de 2-8 °C
Emmagatzematge:Emmagatzemar a -20 °C (llarg termini), 2-8 °C (curt termini)
Reprovació recomanadaVida:2 anys