Premescla de sonda qPCR multiplex
Cat No: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (basada en colorants) és una solució prèvia per a l'amplificació quantitativa de PCR 2 × en temps real caracteritzada per una alta sensibilitat i especificitat, que és de color blau i té l'efecte de l'addició de mostres.Aquest producte és un reactiu premesclat 2× Mix que permet fins a quatre reaccions de PCR quantitatives fluorescents en un sol pou de reacció.Aquest producte conté el mètode d'anticossos modificats genèticament per a l'enzim Taq d'inici en calent, millorant considerablement la sensibilitat i l'especificitat de l'amplificació.Al mateix temps, aquest producte ha optimitzat profundament el tampó de reaccions múltiples, que pot millorar l'eficiència d'amplificació de la reacció i promoure l'amplificació efectiva de plantilles de baixa concentració.Aquest producte es pot utilitzar per genotipat i anàlisi quantitativa multiplex.
Especificació
| Inici en calent | Arrencada en calent integrat |
| Mètode de detecció | Detecció d'encebador-sonda |
| Mètode PCR | qPCR |
| Polimerasa | Taq DNA polimerasa |
| Tipus de mostra | ADN |
Condicions d'emmagatzematge
El producte s'envia amb gel sec i es pot emmagatzemar a -25 ~ -15 ℃ durant 2 anys.
Instruccions
1. ReaccióSistema
| Components | Volum (μl) | Concentració final |
| 2 × TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Barreja d'imprimació (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Mescla de sondes (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Colorant de referència Rox | 0,5 | 1× |
| Plantilla DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | fins a 25 | - |
Notes:Barrejar bé abans d'utilitzar per evitar bombolles excessives per sacsejades vigoroses.
a.Concentració d'imprimació: La barreja d'imprimació conté múltiples parells d'imprimació, normalment cada imprimació a una concentració final de 0,2 μmol/L i també es pot ajustar entre 0,1 i 0,5 μmol/L segons correspongui.
b.Concentració de la sonda: Probe Mix conté múltiples sondes amb diferents senyals de fluorescència, i la concentració de cada sonda es pot ajustar entre 50 i 250 nmol/L segons la situació específica.
1.Referència de colorant Rox: s'utilitza en instruments d'amplificació de PCR en temps real com Applied Biosystems per corregir l'error del senyal de fluorescència generat entre els pous;aquest producte no conté referència de colorant Rox.Es recomana Cas#10200 si cal.
2.Dilució de la plantilla: la qPCR és altament sensible i es recomana diluir la plantilla per utilitzar-la.Si la plantilla és una solució d'emmagatzematge d'ADNc, el volum de la plantilla no hauria de superar 1/10 del volum total.
3.Sistema de reacció: es recomana 25 μL, 30 μL o 50 μL per garantir l'eficàcia i la repetibilitat de l'amplificació del gen objectiu.
4.Preparació del sistema: si us plau, prepareu-vos al banc super net i utilitzeu les puntes i els tubs de reacció sense residus de nucleases;es recomana utilitzar les puntes amb cartutxos de filtre.Eviteu la contaminació creuada i la contaminació per aerosols.
2.Programa de reacció
| Pas de cicle | Temp. | Temps | Cicles |
| Inicial-desnaturalització | 95 ℃ | 5 minuts | 1 |
| Desnaturalització | 95 ℃ | 15 segons | 45 |
| Recuit/Extensió | 60 ℃ | 30 segons |
Notes:
1.Recuit/Extensió: La temperatura i el temps es poden ajustar adequadament segons el valor Tm de la imprimació dissenyada.
2.Adquisició del senyal de fluorescència: el temps d'adquisició del senyal de fluorescència necessari per a diferents instruments de detecció de qPCR és diferent, si us plau, establiu-lo segons el límit de temps mínim.El temps de diversos instruments comuns s'estableix de la següent manera:
20 segons: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 segons: Applied Biosystems 7300
32 segons: Applied Biosystems 7500
Notes
Si us plau, feu servir l'EPI necessari, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat!
