Kit ELISA CHO HCP
En aquest assaig s'utilitza un mètode ELISA immunosorbent d'un sol pas.Les mostres que contenen CHOK1 HCP reaccionen simultàniament amb l'anticòs anti-CHOK1 de cabra marcat amb HRP i l'anticòs anti-CHOK1 recoberts a la placa ELISA, formant finalment un complex sandvitx d'anticòs marcat amb anticossos en fase sòlida-HCP.L'antigen-anticòs no unit es pot eliminar rentant la placa ELISA.El substrat TMB s'afegeix al pou per a una reacció suficient.El desenvolupament del color s'atura després d'afegir la solució d'aturada i el valor de DO o absorbància de la solució de reacció a 450/650 nm es llegeix amb un lector de microplaques.El valor OD o valor d'absorbància és proporcional al contingut de HCP a la solució.A partir d'això, la concentració d'HCP a la solució es pot calcular segons la corba estàndard.
Aplicació
Aquest kit s'utilitza per detectar quantitativament el contingut de residus de proteïnes de la cèl·lula hoste CHOK1 a les mostres.
Coponents
| S/N | Component | Concentració | Condicions d'emmagatzematge |
| 1 | Estàndard CHOK1 HCP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃, protegir de la llum |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, protegir de la llum |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Solució d'aturada | NA | RT |
| 6 | Segelladors de microplaques | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Plaques de prerevestiment d'alta adsorció | NA | 2-8 ℃ |
Equip necessari
| Consumibles / Equips | Fabricació | Catàleg |
| Lector de microplaques | Dispositius Moleculars | Spectra Max M5, M5e o equivalent |
| Termomesclador | Eppendorf | Eppendorf/5355, o equivalent |
| Mesclador de vortex | IKA | MS3 Digital, o equivalent |
Emmagatzematge i estabilitat
1.Transport a -25~-15°C.
2.Les condicions d'emmagatzematge són les que es mostren a la Taula 1;els components 1-2 s'emmagatzemen ≤–20 °C, 5-6 s'emmagatzemen RT, 3、4、7、8 s'emmagatzemen a 2-8℃;el període de validesa és de 12 mesos.
Paràmetres del producte
1.Sensibilitat: 1ng/ml
2.Interval de detecció: 3-100 ng/mL
3.Precisió: CV intraassaig ≤ 10%, CV interassaig ≤ 15%
4.Cobertura de HCP: >80%
5.Especificitat: aquest kit és universal, ja que reacciona específicament amb CHOK1 HCP independentment del procés de purificació.
Preparació de reactius
1.PBST 0,05%
Agafeu 15 ml de 20×PBST 0,05%, diluït en ddH2O, i es va fer fins a 300 ml.
2.1,0% BSA
Agafeu 1 g de BSA de l'ampolla i diluïu-lo en 100 ml de PBST al 0,05%, barregeu bé fins que es dissolgui completament i emmagatzemeu-lo a 2-8 °C.El tampó de dilució preparat és vàlid durant 7 dies.Es recomana preparar-lo segons sigui necessari.
3.Solució de detecció 2μg/mL
Agafeu 48 μL de 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP i diluïu-los en 11.952 μL de BSA a l'1% per obtenir una concentració final de solució de detecció de 2μg/mL.
4.QC i Preparació dels estàndards CHOK1 HCP
| Tub No. | Original | Concentració | Volum | 1% BSA | Volum total | Final |
| A | Estàndard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Taula: Elaboració de QC i estàndards
Procediment d'assaig
1.Prepareu els reactius tal com s'indica a "Preparació de reactius" anterior.
2.Agafeu 50 μL d'estàndards, mostres i QC (consulteu la taula 3) a cada pou i, a continuació, afegiu 100 μL de solució de detecció (2 μg/mL);Cobriu la placa amb segellador i col·loqueu la placa ELISA a la termomescladora.Incubar a 500 rpm, 25 ± 3 ℃ durant 2 hores.
3.Inverteix la microplaca a l'aigüera i descarta la solució de recobriment.Pipeteu 300 μL de PBST al 0,05% a cada pou per rentar la placa ELISA i descartar la solució, i repetir el rentat 3 vegades.Inverteix el plat sobre una tovallola de paper neta i eixuga.
4.Afegiu 100 μL de substrat TMB (vegeu la taula 1) a cada pou, segellar la placa ELISA i incubar a la foscor a 25 ± 3 ℃ durant 15 min.
5.Pipeteu 100 μL de solució de parada a cada pou.
6.Mesureu l'absorbància a una longitud d'ona de 450/650 nm amb un lector de microplaques.
7.Analitzeu les dades mitjançant SoftMax o programari equivalent.Traceu la corba estàndard mitjançant un model de regressió logística de quatre paràmetres.
Exemple de corba estàndard
NOTA: Si la concentració d'HCP a la mostra supera el límit superior de la corba estàndard, s'ha de diluir adequadament amb tampó de dilució abans de la prova.
NOTES
La solució d'aturada és àcid sulfúric 2M, si us plau, maneja amb cura per evitar esquitxades!
