ADN polimerasa Bst 2.0 (sense glicerol, alta densitat)
La Bst ADN polimerasa V2 deriva de l'ADN polimerasa I de Bacillus stearothermophilus, que té una activitat d'ADN polimerasa 5'→3' i una forta activitat de substitució de la cadena, però sense activitat exonucleasa 5'→3'.Bst DNA Polymerase V2 és ideal per al desplaçament de cadena, amplificació isotèrmica LAMP (amplificació isotèrmica mediada per bucle) i seqüenciació ràpida.Aquesta ADN polimerasa Bst V2 és capaç d'inhibir l'activitat de l'ADN polimerasa a temperatura ambient, de manera que es pot operar i el sistema de reacció es pot formular a temperatura ambient, evitant l'amplificació inespecífica i millorant l'eficiència de la reacció, i aquesta versió pot estar liofilitzat.A més, és capaç d'alliberar la seva activitat a temperatures elevades, eliminant així la necessitat d'un pas d'activació independent.
Components
| Component | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst DNA polimerasa V2 (sense glicerol) (32U/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplicacions
1.Amplificació isotèrmica LAMP
2.Reacció de desplaçament d'una cadena d'ADN
3.Seqüenciació de gens GC alt
4.Seqüenciació d'ADN a nivell de nanogrames.
Condició d'emmagatzematge
Transport a menys de 0 °C i emmagatzemat a -25 °C ~ -15 °C.
Definició de la unitat
Una unitat es defineix com la quantitat d'enzim que incorpora 25 nmol de dNTP al material insoluble en àcid en 30 minuts a 65 °C.
Reacció LAMP
| Components | 25 μLSistema |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μl |
| dNTP (10 mM cadascun) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Verd (25×)a | 1,0 μl |
| Primer mesclab | 6 μl |
| Bst DNA polimerasa V2 (sense glicerol) (32 U/uL) | 0,25 μl |
| Plantilla | × μL |
| ddH₂O | Fins a 25 μL |
Notes:
1) a.SYTOTM 16 Verd (25×): Segons les necessitats experimentals, es poden utilitzar altres colorants com a substituts;
2) b.Mescla d'imprimació: s'obté barrejant 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB i altres volums.
Reacció i condició
1 × HC Bst V2 Buffer, la temperatura d'incubació està entre 60 °C i 65 °C.
Inactivació per calor
80 °C, 20 minuts.
