ADN polimerasa Bst 2.0 (sense glicerol)
La Bst ADN polimerasa V2 deriva de l'ADN polimerasa I de Bacillus stearothermophilus, que té una activitat d'ADN polimerasa 5'→3' i una forta activitat de substitució de la cadena, però sense activitat exonucleasa 5'→3'.Bst DNA Polymerase V2 és ideal per al desplaçament de cadena, amplificació isotèrmica LAMP (amplificació isotèrmica mediada per bucle) i seqüenciació ràpida.
Components
| Component | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerasa V2 (sense glicerol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplicacions
1.Amplificació isotèrmica LAMP
2. Reacció de desplaçament simple de cadena d'ADN
3.Seqüenciació de gens GC alt
4.Seqüenciació d'ADN a nivell de nanogrames.
Condició d'emmagatzematge
Transport a menys de 0 °C i emmagatzemat a -25 °C ~ -15 °C.
Definició de la unitat
Una unitat es defineix com la quantitat d'enzim que incorpora 25 nmol de dNTP al material insoluble en àcid en 30 minuts a 65 °C.
Control de qualitat
1.Assaig de puresa de proteïnes (SDS-PAGE):La puresa de l'ADN polimerasa Bst V2 es determina ≥99% mitjançant l'anàlisi SDS-PAGE mitjançant la detecció de Coomassie Blue.
2.Activitat exonucleasa:La incubació d'una reacció de 50 μL que conté un mínim de 8 U d'ADN polimerasa Bst V2 amb 1 μg d'ADN digerit λ -Hind Ⅲ durant 16 hores a 37 ℃ no produeix una degradació detectable tal com es determina.
3.Activitat Nickase:La incubació d'una reacció de 50 μL que conté un mínim de 8 U d'ADN polimerasa Bst V2 amb 1 μg d'ADN pBR322 durant 16 hores a 37 °C no produeix una degradació detectable tal com s'ha determinat.
4.Activitat RNasa:La incubació d'una reacció de 50 μL que conté un mínim de 8 U d'ADN polimerasa Bst V2 amb 1,6 μg d'ARN MS2 durant 16 hores a 37 °C no produeix una degradació detectable tal com s'ha determinat.
5.ADN d'E. coli:120 U d'ADN polimerasa Bst V2 s'examinen per detectar la presència d'ADN genòmic d'E. coli mitjançant qPCR TaqMan amb cebadors específics per al locus rRNA 16S d'E. coli.La contaminació de l'ADN genòmic d'E. coli és ≤1 còpia.
Reacció LAMP
| Components | 25μL |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μl |
| dNTP (10 mM cadascun) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Verd (25×)a | 1,0 μl |
| Primer mesclab | 6 μl |
| Bst DNA polimerasa V2 (sense glicerol) (8 U/uL) | 1 μl |
| Plantilla | × μL |
| ddH₂O | Fins a 25 μL |
Notes:
1) a.SYTOTM 16 Verd (25×): Segons les necessitats experimentals, es poden utilitzar altres colorants com a substituts;
2) b.Mescla d'imprimació: s'obté barrejant 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB i altres volums.
Reacció i condició
1 × HC Bst V2 Buffer, la temperatura d'incubació està entre 60 °C i 65 °C.
Inactivació per calor
80 °C, 20 minuts
