BspQI
BspQI es pot expressar de manera recombinant en E. coli que pot reconèixer llocs específics i es produeixen sota
BspQI, una endonucleasa de restricció de restricció IIs, deriva d'una soca d'E. coli recombinant que porta el gen BspQI clonat i modificat de Bacillus sphaericus.Pot reconèixer llocs específics, i la seqüència de reconeixement i els llocs d'escissió són els següents:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Característiques del producte
1. Alta activitat, digestió ràpida;
2. Baixa activitat estel·lar, assegurant un tall precís com el "bisturí";
3. Sense BSA i lliure d'origen animal;
Sensibilitat a la metilació
Dsóc metilació:No sensible;
Dcm metilació:No sensible;
Metilació CpG:No sensible;
Condicions d'emmagatzematge
El producte s'ha d'enviar ≤ 0 ℃;Emmagatzemar a -25 ~ - 15 ℃ condicions.
Buffer d'emmagatzematge
Tris-HCl 20 mM, EDTA 0,1 mM, KCl 500 mM, ditiotreitol 1,0 mM, albúmina recombinant 500 µg/ml, Trition X-100 al 0,1% i glicerol al 50% (pH 7,0 a 25 °C).
Definició de la unitat
Una unitat es defineix com la quantitat d'enzim necessària per digerir 1 µg d'ADN de control intern en 1 hora a 50 °C en un volum de reacció total de 50 µL.
Control de qualitat
Assaig de puresa de proteïnes (SDS-PAGE):La puresa de BspQI va ser ≥95% determinada per anàlisi SDS-PAGE.
RNasa:10U de BspQI amb 1,6 μg d'ARN MS2 durant 4 hores a 50 ℃ no produeixen degradació tal com es determina per electroforesi en gel d'agarosa.
Activitat de DNasa no específica:10U de BspQI amb 1 μg λ ADN a 50 ℃ durant 16 hores, en comparació amb 50 ℃ durant 1 hora, no produeix excés d'ADN tal com es determina per electroforesi en gel d'agarosa.
Lligadura i retallada:Després de la digestió d'1 μg de λDNA amb 10U BspQI, els fragments d'ADN es poden lligar amb ADN lligasa T4 a 16ºC.I aquests fragments lligats es poden retallar amb BspQI.
E. coli ADN: La detecció de TaqMan qPCR específica de l'ADNr d'E. coli 16s va mostrar que el residu del genoma d'E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Residus de proteïna hoste:≤ 50 ppm
Bacterià Endotoxina: Prova LAL, segons l'edició 2020 de la Farmacopea Xinesa IV, mètode de prova de límit de gel, regla general (1143).El contingut d'endotoxines bacterianes ha de ser ≤10 EU/mg.
Sistema de reacció i condicions
| Component | Volum |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| ADN | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μl |
| dd H2O | Fins a 50 μL |
Condicions de reacció: 50 ℃, 1~16 h.
Inactivació per calor: 80 °C durant 20 min.
El sistema de reacció i les condicions recomanades poden proporcionar un efecte de digestió enzimàtica relativament bo, que només és de referència, consulteu els resultats experimentals per obtenir-ne més detalls.
Aplicació del producte
Digestió amb endonucleases de restricció, clonació ràpida.
Notes
1. El volum de l'enzim ≤ 1/10 del volum de reacció.
2. L'activitat de les estrelles es pot produir quan la concentració de glicerol és superior al 5%.
3. L'activitat d'escissió pot produir-se quan el substrat està per sota de la proporció recomanada.
