Ultra Nucleasa
UltraNuclease és una enginyeria genètica derivat de Serratia marcescens, que és capaç de degradar l'ADN o l'ARN, ja sigui de cadena simple o doble, lineal o circular en una àmplia gamma de condicions, degrada completament els àcids nucleics en oligonucleòtids de 5'-monofosfat amb una longitud de 3-5 bases. .Després de la modificació de l'enginyeria genètica, el producte es va fermentar, expressar i purificar en Escherichia coli (E. coli), que redueix la viscositat del sobrenedant cel·lular i la investigació científica del lisat cel·lular, però també millora l'eficiència de purificació i la investigació funcional de proteïnes.També es pot utilitzar en la teràpia gènica, la purificació de virus, la producció de vacunes, la indústria farmacèutica de proteïnes i polisacàrids com a reactiu d'eliminació d'àcids nucleics de residus hoste.
Característiques del producte
| CAS Núm. | 9025-65-4 |
| CE núm. | |
| Pes molecular | 30 kDa |
| Punt isoelèctric | 6,85 |
| Puresa de proteïnes | ≥99% (SDS-PAGE i SEC-HPLC) |
| Activitat específica | ≥1.1×106U/mg |
| Temperatura òptima | 37°C |
| pH òptim | 8.0 |
| Activitat proteasa | negatiu |
| Biocàrrega | ＜10 CFU/100.000U |
| Proteïna residual de la cèl·lula hoste | ≤10 ppm |
| Metall pesat | ≤10 ppm |
| Endotoxina bacteriana | ＜0,25EU/1000U |
| Buffer d'emmagatzematge | Tris-HCl de 20 mM, pH 8,0, MgCl2 2 mM, 20 mM NaCl, 50% glicerol |
Condicions d'emmagatzematge
Transport ≤0 °C; -25 ~ -15 °C Emmagatzematge, 2 anys de validesa (evitar la congelació-descongelació).
Definició de la unitat
La quantitat d'enzim utilitzada per canviar el valor d'absorció de △A260 en 1,0 en 30 minuts a 37 ° C, pH 8,0, equivalent a 37 μg d'ADN d'esperma de salmó digerit tallant en oligonucleòtids, es va definir com a unitat activa (U).
Control de qualitat
Proteïna residual de la cèl·lula hoste: kit ELISA
•Proteasa Residus: 250KU/mL UltraNuclease va reaccionar amb el substrat durant 60 minuts, no es va detectar cap activitat.
•Endotoxina bacteriana: LAL-Test, Farmacopea de la República Popular de la Xina Volum 4 (edició 2020) mètode de prova de límit de gel.Regles Generals (1143).
•Càrrega biològica: Farmacopea de la República Popular de la Xina Volum 4 (edició 2020): general
Regles per a la prova d'esterilitat (1101), estàndard nacional de la PRC, GB 4789.2-2016.
•Metall pesat:ICP-AES, HJ776-2015.
Funcionament
L'activitat UltraNuclease es va inhibir significativament quan la concentració de SDS era superior al 0,1% o EDTA
La concentració va ser superior a 1 mM. El tensioactiu Triton X-100, Tween 20 i Tween 80 no van tenir cap efecte sobre la nucleasa
propietats quan la concentració era inferior a l'1,5%.
| Funcionament | Funcionament òptim | Operació vàlida |
| Temperatura | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| TDT | 0-100 mM | > 100 mm |
| 2-Mercaptoetanol | 0-100 mM | > 100 mm |
| Ió metàl·lic monovalent (Na+, K+, etc.) | 0-20 mm | 0-200 mm |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Ús i dosificació
• Eliminar l'àcid nucleic exògen dels productes vacunals, reduir el risc de toxicitat residual d'àcid nucleic i millorar la seguretat del producte.
• Reduir la viscositat del líquid d'alimentació causada per l'àcid nucleic, escurçar el temps de processament i augmentar el rendiment de proteïnes.
• Eliminar l'àcid nucleic que embolcalla la partícula (virus, cos d'inclusió, etc.), que és propici
a l'alliberament i purificació de la partícula.
| Tipus experimental | Producció de proteïnes | Virus, vacuna | Drogues cel·lulars |
| Número de cel·les | 1 g de pes humit de cèl·lules (resuspent amb 10 ml de tampó) | Fermentació 1L sobrenedant líquid | 1L de cultura |
| Dosi Mínima | 250U | 100U | 100U |
| Dosi recomanada | 2500U | 25000U | 5000U |
• El tractament amb nucleases pot millorar la resolució i la recuperació de la mostra per a cromatografia en columna, electroforesi i anàlisi de blotting.
• En la teràpia gènica s'elimina l'àcid nucleic per obtenir virus adenoassociats purificats.
