Multiplex One Step RT-qPCR Premix
Descripció
Cat No: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix és un kit de PCR quantitatiu multiplex basat en ARN com a plantilla.En l'experiment, la transcripció inversa i la PCR quantitativa es realitzen en el mateix tub de reacció, simplificant l'operació experimental i reduint el risc de contaminació.El disseny únic del tampó i la barreja d'enzims es pot utilitzar en un sistema liofilitzat d'un sol pas.El kit utilitza transcriptasa inversa resistent a la calor per a una síntesi eficient de l'ADNc de la primera cadena mitjançant l'ADN polimerasa Taq d'inici en calent per a l'amplificació quantitativa.Conté un tampó de reacció optimitzat, una barreja d'enzims, etc., i es van afegir factors que inhibeixen eficaçment l'amplificació de PCR no específica i milloren l'eficiència d'amplificació de múltiples reaccions qPCR, permetent una amplificació quantitativa de fluorescència múltiple alhora que garanteixen l'eficiència d'amplificació dels primers.
Components
| Nom |
| 1. Lyo-Buffer |
| 2. Barreja de lioenzims |
| 3. Lyoprotector |
Condicions de transportió
A: Lyo-tampó i protector: -25 ~ -15 ℃, la vida útil és d'1 any.
B: barreja de lioenzims, 2-8 ℃, la vida útil és de 6 mesos.
Instrucció de funcionament
1. Sistema de reacció (Preneu 25 μL com a exemple)
| Components | Volum (μl) | Concentració final |
| Lyo-Buffer | 6 | 1* |
| Barreja de lioenzims | 1 | - |
| Lioprotector | 8 | - |
| Barreja d'imprimació (10 μM) | 1 | 0,1-1 uM |
| Barreja de sondes (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 uM |
| Plantilla RNA | 5 | - |
| DEPC H2O | Fins a 25 | - |
2. Protocol de ciclisme optimitzat
1) Protocol estàndard de ciclisme
| Fase de reacció | Temperatura | Temps | Cicle | |
| 1 | Transcripció inversa | 50°Ca | 10 min | 1 |
| 2 | Desnaturalització inicial | 95°C | 5 min | 1 |
| 3 | Reacció d'amplificació | 95°C | 15 segons | 45 cicles |
| 60°Cb | 30 segonsc |
2) Protocol de ciclisme ràpid
|
| Fase de reacció | Temperatura | Temps | Cicle |
| 1 | Transcripció inversa | 50°Ca | 2 min | 1 |
| 2 | Desnaturalització inicial | 95°C | 2 seg | 1 |
| 3 | Reacció d'amplificació | 95°C | 1 seg |
45 cicles |
| 60°Cb | 13 segonsc |
Nota:
a) Revés transcripció: La temperatura pot seleccionar 42 °C o 50 °C durant 10-15 minuts.
b) Reacció d'amplificació: La temperatura s'ajusta segons el valor de Tm de les imprimacions dissenyades.
c)Fluorescència senyal adquisició: establiu el procediment experimental segons els requisits de lamanual de l'instrument.
Informació tècnica/Especificacions
| Inici en calent | Arrencada en calent integrat |
| Mètode de detecció | Detecció d'encebador-sonda |
| Mètode PCR | RT-qPCR d'un pas |
| Tipus de mostra | ARN |
Notes
1. Aquest producte només és per a ús d'investigació.
2. Si us plau, feu servir l'EPI necessari, com ara bata de laboratori i guants, per garantir la vostra salut i seguretat!
