DNasa I
La DNasa I (desoxiribonucleasa I) és una endodesoxiribonucleasa que pot digerir ADN de cadena simple o doble.Reconeix i escinda enllaços fosfodièster per produir monodesoxinucleòtids o oligodesoxinucleòtids de cadena simple o doble amb grups fosfat al terminal 5′ i hidroxil al terminal 3′.L'activitat de la DNasa I depèn del Ca2+ i pot ser activada per ions metàl·lics divalents com Mn2+ i Zn2+.5mM Ca2+ protegeix l'enzim de la hidròlisi.En presència de Mg2+, l'enzim podria reconèixer i escindir aleatòriament qualsevol lloc de qualsevol cadena d'ADN.En presència de Mn2+, les cadenes dobles d'ADN es poden reconèixer i escindir simultàniament en gairebé el mateix lloc per formar fragments d'ADN d'extrem pla o fragments d'ADN d'extrem enganxós amb 1-2 nucleòtids que sobresurten.
Propietat del producte
La DNasa I del pàncrees boví es va expressar en el sistema d'expressió de llevats i es va purificar.
Coponents
| Component | Volum | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNasa I, lliure de RNasa | 20μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| Tampó 10×DNasa I | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport i emmagatzematge
1. Estabilitat d'emmagatzematge: - 15 ℃ ~ -25 ℃ per a l'emmagatzematge;
2.Estabilitat del transport: transport sota paquets de gel;
3. Subministrat en: Tris-HCl 10 mM, CaCl 2 mM2, 50% de glicerol, pH 7,6 a 25 ℃.
Definició de la unitat
Una unitat es defineix com la quantitat d'enzim que degradarà completament 1 µg d'ADN pBR322 en 10 minuts a 37 °C.
Control de qualitat
RNasa:5U de DNasa I amb 1, 6 μg d'ARN MS2 durant 4 hores a 37 ℃ no produeixen degradació tal com es determina per electroforesi en gel d'agarosa.
Bacterià Endotoxina:Prova LAL, segons l'edició 2020 de la Farmacopea Xinesa IV, mètode de prova de límit de gel, regla general (1143).El contingut d'endotoxines bacterianes ha de ser ≤10 EU/mg.
Instruccions d'ús
1.Prepareu la solució de reacció al tub sense RNasa segons les proporcions que s'indiquen a continuació:
| Component | Volum |
| ARN | X μg |
| 10 × DNasa I tampó | 1 μl |
| DNasa I, lliure de RNasa (5U/μL) | 1 U per μg d'ARN |
| ddH2O | Fins a 10 μL |
2,37 ℃ durant 15 minuts;
3.Afegiu el tampó de terminació per aturar la reacció i escalfeu-lo a 65 ℃ durant 10 minuts per inactivar la DNasa I. La mostra es pot utilitzar directament per al següent experiment de transcripció.
Notes
1.Utilitzeu 1U DNasa I per μg d'ARN, o 1U DNasa I per a menys d'1μg d'ARN.
2. S'ha d'afegir EDTA a una concentració final de 5 mM per protegir l'ARN de la degradació durant la inactivació de l'enzim.
